更快克隆出重组表达质粒

虽然现在在许多做科研的学生看来，能出实验结果是最重要的，中间的过程不是那么重要。可是只有创新的技术才能推动科学不断的进步，比如：如果我们一直采用手工法测序，那真是不知道要猴年马月才能有人类基因组测序图谱，更难以进行下一步的研究了。

对科研工作者而言，做实验就像是挖矿，你觉得那里面应该有非常有价值的东西就去挖了。刚开始你手工挖，觉得也太辛苦了，这时候Invitrogen跑出来，给你一把铲子，让你更有效率的去挖你的宝藏。无论你是否挖出金山、银山，反正Invitrogen靠着这把铲子发家了。

好了，罗嗦了这么久，你一定很想了解一下Invitrogen的这把铲子了吧，让我们言归正传。

Invitrogen公司总共有四个原核表达系统它们分别是：Champion™ pET Expression System、HisPatch ThioFusion System、pBAD Inducible Bacterial System、pL System和T7-based Systems。

这四个系列的载体可谓把原核表达的发展史中出现过的几种启动子都囊括进去了，包括T7、pL、pBAD和trc启动子，同时几种经典的调控方式也都出现了，包括有乳糖操纵子、色氨酸操纵子和阿拉伯糖操纵子。

冠军系列

Champion™ pET Expression System之所以取了个冠军系统的称号是因为它结合了经典的T7表达系统和Invitrogen的王牌定向TOPO技术及Gateway技术，这可谓是强强联手。

讲到TOPO技术可能还有一些人不太熟悉，可是说到T载许多人也许马上会说“哦，知道了”。Invitrogen是TA克隆的创始者，对于做原核表达的人来说体会可能不是很深刻，可是对于做分子进化的人来说TA克隆可是帮了一个大忙。

定向TOPO克隆完全不需要酶切和传统连接反应，五分钟就可以做出一个克隆。以前，用T载最苦恼的问题就是无法定向将PCR片断插入到载体中，现在Invitrogen已经克服了这个问题。在载体上多加四个碱基GTGG，就是这四个碱基使它可以与PCR产物定向连接。其作用机理见下图。

结合TOPO技术的有五个系列载体：pET100/D-TOPO®、pET101/D-TOPO®、pET102/D-TOPO®、pET151/D-TOPO®和pET200/D-TOPO®，这五个载体根据所带的标记、是否具有蛋白酶切位点而各有不同。详细信息参见下图。

结合TOPO技术的有五个系列载体：pET100/D-TOPO®、 pET101/D-TOPO®、 pET102/D-TOPO®、 pET151/D-TOPO®和pET200/D-TOPO®，这五个载体根据所带的标记、是否具有蛋白酶切位点而各有不同。