中性粒细胞杀菌功能的检测―全血化学发光测定法

基本原理

过氧化物生成系统在杀菌过程中起重要作用。中性粒细胞被激活时，其NADPH氧化酶亦被活化，发生氧化还原反应，形成过氧化离子，随后通过超氧化物歧化酶（SOD）将其转变为H2O2 ，参入细胞内杀菌。H2O2 在过氧化物酶作用下，形成次氯酸和卤化物是另一种杀菌机理。

过氧化离子不稳定，在其分解过程中可激活鲁米诺（氨基苯二酰-肼）类物质，并使之发生荧光，通过生成荧光的强度可直接或者间接地测知过氧化离子生成的情况，即中性粒细胞细胞内杀菌能力。本法是氧化爆发检测中最为敏感，并可直接定量的方法。

试剂及材料

1. 肝素抗凝血标本。

2. 鲁米诺发光剂：先用DMSO溶解鲁米诺，再用无菌的生理盐水配制成10-2mol/L的贮存液，盛于棕色瓶内（或外包黑纸），4℃保存，可使用1月左右。

3. 酵母多糖：将酵母多糖用生理盐水配成10mg/ml的混悬液，置水浴煮沸20min，1500r/min离心10min，沉淀物重新悬于EM-H液中（5mg/ml），4℃保存。

4. 含0.05molHEPES的Eagle组织培养液（EM-H液），pH7.4。

5. 发光测定仪。

操作方法

1. 在聚苯乙烯小管内加入肝素抗凝血0.1ml及EM-H液0.8ml，混合后放入37℃水浴保温20min；

2. 加入鲁米诺发光剂20μl（终浓度为10-5 mol/L），混匀后置于仪器的测定室内，37℃平衡10min，连续测本地5次，每次10s；

3. 加入酵母多糖液0.1ml，启动吞噬发光。每间隔3-5min，测6s或10s的化学发光一次，直至测出发光峰值；

结果分析

以发光强度（cps）为纵坐标，测定时间（s）为横坐标，绘制化学发光反应曲线。峰值主要反映中性粒细胞的氧化杀菌能力，发光强度的积分值反映中性粒细胞的吞噬功能。