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常规片段的琼脂糖凝胶回收

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常规片断级的选择指南: 所谓常规级,即回收片段大小介于100bp和10kb之间,在这个范畴内包含了一般的质粒或者克隆片段的回收。主流方法是柱回收试剂盒。

1. Qiaquick Gel Extraction Kit

品牌:Qiagen

回收范围:70bp-10kb

特点:

高达80%回收率

操作快速简单,3步完成70bp-10kb片段的回收

提供三色指示剂的电泳上样loading Buffer,方便判断和操作

回收产物纯度高,可用于同位素或荧光测序、芯片分析、连接转化、酶切、标记、PCR、显微注射、体外转录等后继实验

使用心得:

Qiaquick最引以为傲的就是非常稳定的质量,高回收率和方便的步骤。

产品质量的稳定可靠,一向是实验首要条件。毕竟,实验步骤是环环相扣的,每一步出现问题都会导致后患无穷,费时费力,还更费钱,对心情更是一种折磨。

用试剂盒不就图省事和可靠吗?从核酸纯化领域起步的Qiagen,在全球实验室都享有极好的口碑,是值得信赖的选择。

因为Qiagen有强大的研发队伍,精益求精优化实验操作的每一环节,绝非普通临摹制品、仿制品可比。

以回收率为例,我们前面提到,由于样品的大小和多少对回收率都有显著的影响,所以回收率并非是一成不变的。所以Qiagen以严谨的态度提供多种条件下的详细介绍:

使用QIAquick回收之前和回收之后再混合的DNA 片段 (大小已指出) 。对所有尺寸的片段均获得了接近80%的回收率。

A 1-5 : 回收之前; P : 回收之后再混合。样品使用 1.5% 琼脂糖凝胶分析(TAE buffer)。

B 1-3: 回收之前; P : 回收之后混合。样品于 3.5% 高分辨琼脂糖凝胶上分析( TAE buffer)。M : pTZ-HinfI marker。

记得《分子克隆II》里曾经说少于500ng的DNA 几乎没有回收价值,看看上表就可以发现,现在的技术发展,即使是少到100ng的DNA 还有70%的回收率呢!而且操作方法还很简单。

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