腺病毒系统重组技术

目前构建重组腺病毒系统的策略，主要有三种

1)体外直接连接(clontech的ADENO-X系统)

2)在细菌中重组的策略(adeasy系统)

3)在293细胞中重组的策略（AdMax系统）

国家人类基因组北方研究中心通过与美国Vector Biolab公司合作开发出了一套不同于以上策略的新的重组腺病毒系统。通过这套系统，实现了重组腺病毒载体构建，包装的高通量化。在不到一年的时间里，成功构建，包装了500多个腺病毒。通过对穿梭载体，骨架载体，包装细胞系的改进，提高了病毒的滴度，比目前其它腺病毒系统得到的滴度都高。而且可以包装比较大的有毒性作用的基因。这套系统的建立无疑是对国内基因治疗领域的促进，提高了科研效率，降低了科研成本。

这套系统的解决了目前重组腺病毒系统的很多技术难题：

1． 提高了病毒的滴度。一次大规模扩增，纯化得到的病毒量可以满足上百只裸鼠实验或几十只大鼠实验。

2． 可以包装任何有细胞毒性的基因。针对肿瘤的基因治疗经常会选择有细胞毒性的凋亡相关基因来实现杀伤肿瘤细胞的目的。这套系统解决了这样的难题。

3． 可以包装内部有PacI位点的插入基因。大多系统都选择PacI酶切线性化viral DNA，如果基因内部有PacI位点往往给研究者带来困难。

4． 缩短了重组腺病毒载体的构建周期，而且可以开展大规模的载体构建，病毒包装项目。为研究者开展后续的实验项目或者进行更大，更具规模化的科研项目节约了时间和成本。

5． 滴度测定更快，更准确。一般的滴度测定方法，两次重复实验都会有很大的偏差，该系统优化了滴度测定的条件，使得滴度测定工作只需要三天时间，两次重复滴度测定偏差不超过40%。

6． 100%的包装成功率。穿梭载体系统命名为pDual系列穿梭载体，Dual代表可与两套病毒骨架载体兼容，用其中一套的包装成功率为99%以上，在包装500个腺病毒过程中只有一个没有包装成功。剩下的1%不好包的，不用再重新构建穿梭载体就可以马上换另一套系统。这样降低了风险，节省了客户的时间。