为什么pcr退火温度高，结果特异性强，退火温度低非特异多？

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PCR退火温度应如何设置？

DNA 的双链主要是靠氢键联系在一起。

退火温度越高，断开氢键的热能越大，引物 与模板越不易结合，反之，退火温度越低，越容易形成氢键，进行退火。

所以当温度高时，只有碱基匹配程度高的，也就是模板与引物形成配对数越多的引物，才能结合到模板上，这样扩增出来的条带最少，甚至只有一条，也就是引物和目的序列的完美匹配， 因此特异性越高。

反之，若退火 温度低，引物和模板匹配低时，也能稳定存在，那么模板上可能存在很多区域能和引物上的少量碱基匹配，进行引发，因此dna条带会很多，非特异带增加。

特异带是指你的目的带。非特异带是pcr中扩增出的非目的带。

退火是指温度下降，单链DNA与引物结合的过程。温度过低，可造成引物与模板之间只需有一小段可以互补配对就能配对，造成非特异性产物增加。而温度高时，需要引物与模版之间有较长的互补配对序列才能相互配对，特异性增强。