原理
NAE将α－乙酸萘酚水解，产生α－萘酚，再与重氮盐偶联，生成不溶性的有色沉淀位于胞质中。
材料与仪器
磷酸盐缓冲液 α－乙酸萘酚 加重氮盐 甲基绿水港派
步骤
一、 实验试剂：
1. 作用液：l／20mol／L 磷酸盐缓冲液（PH7.4）40mg加10g／Lα－乙酸萘酚（以50％丙酮做溶剂）0.8ml，充分振荡，直至最初产生的混浊物大部分消失为止，加重氮盐，（坚牢蓝B或其他种均可）40mg振荡，过滤后使用．
2. 1g／L甲基绿水港派
二、 实验操作：
l. 固定新鲜涂片置10％甲醛生理盐水固定5min
2. 流水冲洗5min
3. 加入37℃作用液中1小时
4. 水洗
5. lg/L甲基绿水溶液复染5min
6. 水洗，干后镜检．
NaF抑制试验：方法同上，在 40ml作用液中加入氟化钠（NaF）6mg（每毫升作用液加NaF－l.5mg），若阳性明显减弱或呈阴性，示被NaF抑制最好能计算NaF抑制率，其公式为：
（加NaF后NSE积分值/未加NaF时的NSE积分值）×100％凡抑制率＞50％者，提示确受NaF所抑．四. 实验判定结果：细胞质内有灰黑色或棕黑色弥漫性或颗粒状沉淀为阳性，胞质内无沉淀者为阴性．
1. 作用液：l／20mol／L 磷酸盐缓冲液（PH7.4）40mg加10g／Lα－乙酸萘酚（以50％丙酮做溶剂）0.8ml，充分振荡，直至最初产生的混浊物大部分消失为止，加重氮盐，（坚牢蓝B或其他种均可）40mg振荡，过滤后使用．
2. 1g／L甲基绿水港派
二、 实验操作：
l. 固定新鲜涂片置10％甲醛生理盐水固定5min
2. 流水冲洗5min
3. 加入37℃作用液中1小时
4. 水洗
5. lg/L甲基绿水溶液复染5min
6. 水洗，干后镜检．
NaF抑制试验：方法同上，在 40ml作用液中加入氟化钠（NaF）6mg（每毫升作用液加NaF－l.5mg），若阳性明显减弱或呈阴性，示被NaF抑制最好能计算NaF抑制率，其公式为：
（加NaF后NSE积分值/未加NaF时的NSE积分值）×100％凡抑制率＞50％者，提示确受NaF所抑．四. 实验判定结果：细胞质内有灰黑色或棕黑色弥漫性或颗粒状沉淀为阳性，胞质内无沉淀者为阴性．
常见问题
1. 标本必须新鲜，应于取材后两天内染色，否则酶的活性显著降低．若冰箱内保存，可适当延长保存时间．
2. 重氮盐的选择，以坚固蓝B．坚固蓝RR及坚固黑B重氮盐的染色为好．
2. 重氮盐的选择，以坚固蓝B．坚固蓝RR及坚固黑B重氮盐的染色为好．
来源：丁香实验
