巨噬细胞和淋巴细胞非特异性酯酶染色的方法

问：这可能是一个非常初级的问题，但查了几本书却无任何信息，文献上都是轻描淡写地一提，好像是太原始了似的。可是，我真的不知道该方法如何操作——酯酶浓度，配方以及染色时间等等，盼各位战友的回音。谢谢。

答：以前做过，是做淋巴细胞的。不过巨噬细胞方法一样的，更容易出结果。

非特异性酯酶

一固定液 甲醛-丙酮缓冲液(PH=6.6)

Na2HPO4 20mg，12 ， 50.39mg

KH2PO4 100mg

dH2O 30ml

丙酮 45ml

40%甲醛 25ml

固定血细胞用

二孵育液4%

1．付品红 4g

2N盐酸 100ml将付品红加入到2n盐酸中，水浴溶解过滤后，置4℃，保存备用

2．4%亚硝酸钠液

亚硝酸钠 400mg

蒸馏水 10ml

3．六偶氮付品红溶液

临用前取4%亚硝酸钠溶液3ml，边摇边滴入3ml付品红中，再充分震荡，1min备用

4．2%α醋酸萘酯溶液：取2gα醋酸萘酯溶于100ml乙二醇甲醚中，置4℃冰箱，避光保存备用

5．M/15PH7.6磷酸缓冲液

甲液：KH2PO49.08g溶于1000ml蒸馏水，乙液Na2HPO49.47g溶于1000ml蒸馏水 12H2O，23.882

取甲液13ml，乙液87ml，混合即可

KH2PO40.59g,Na2HPO412H2O 10.39g-500ml

孵育液临用前配制：取m/15，PH=7.6缓冲液89ml，逐滴加入六偶氮付品红液6ml，充分混合后，再滴入2%醋酸萘酯2.5ml，充分混合后调整pH至5.8-6.4

以下石蜡切片，冰冻切片可以用4%多聚甲醛固定，先固定与切片后固定均可

二石蜡切片

1． 将被检组织置于4℃10%中性甲醛钙溶液中固定，过夜

2． 移入4℃holt氏阿拉伯胶糖液至少24hr

3． 置于4℃50%丙酮1hr

4． 转入4℃100%丙酮24hr（换两次），最后一次留在室温约1-2hr

5． 在二甲苯 中透明30min（换两次）

6． 56℃浸蜡30-45min

7． 切片 置于室温或37℃温箱干燥1-2hr。

8． 二甲苯脱蜡，经100%丙酮，50%丙酮各2-3min，然后进入蒸馏水

9． 孵育后步骤与血涂片同，但需经50%丙酮及纯丙酮各30s-1min，二甲苯 透明，然后封藏

holt氏阿拉伯胶蔗糖液

蔗糖30g

阿拉伯胶1g

100ml

用这个酶扩散少些。

1%甲基绿染色液

用于复染