乳鼠肝脏细胞原代培养

一周龄大鼠，断颈处死，活力碘消毒,无菌取出肝脏，于无菌维持液中漂洗，用眼科剪仔细清除肝包膜,韧带,沿肝边缘剪切肝尖组织(绕开肝蒂等)转入青霉素小瓶中，用眼科剪绞碎,剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，加入5倍体积无菌维持液,用滴管轻轻吹打,吸出上层血细胞

再用无菌维持液反复清洗3~5次，加入10倍体积无菌胰蛋白酶消化液,37℃消化，消化过程中不断震荡，至组织块边缘变薄(镜下观),离心(1000rpm,10分钟)弃去上面酶液，用无菌维持液将组织块清洗2~3次，加入新鲜无菌胰蛋白酶消化液重复上述步骤。

此时组织块边缘模糊，1000rpm离心10分钟，取沉淀即为消化下的细胞，重新用无菌维持液悬浮，离心，洗1~2次，用20%生长液悬浮即得细胞悬液；

将消化过的组织块重复消化5~6次至组织块消化完全，重复以上操作，合并几次所得细胞悬液，计数，调整细胞浓度为2×10 5 个细胞/mL，将细胞悬液接种于塑料培养瓶中，置于37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱中培养。

培养48小时后，换新鲜配置的培养液培养5小时，可除去绝大部分血细胞及杂细胞，37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱中培养，每隔3天换培养液，获得单层肝细胞。