96孔板铺板的小技巧

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刚开始用96孔板种细胞时细胞总是分布不均匀，第二天就会发现有些地方出现堆积性生长，而还有不少地方细胞则很稀疏，细胞密集的地方因细胞与细胞之间的接触抑制影响细胞的生长，这样就很难评价干预因素对细胞的作用 ，因此将96孔板种均匀也是进行后续实验的前提，现将我以前用的老办法和最后用的新方法比较一下，以让大家看看各自优缺。

1老方法：种过板子后，用手将96孔板平拿起，左右晃动几下，然后再前后晃动几下，不过这种方法5个复孔中总有2-3个孔中细胞分布不均匀，多数情况下是孔的中间出现成堆分布，为此苦恼了一阵子。还又一次见一师姐将种好的板子放在摇床上摇了几分钟，结果更惨了，细胞全部跑到中间了。

一般96孔板我每孔是加100微升细胞悬液，从孔的左边靠近底部加入，加完半边板后，将未加的细胞悬液混一下再，继续加剩余的半边板子，都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘，注意把握力度(我一般轻巧敲三下)，太强或次数太多会导致细胞集中成堆，将板顺时针旋转(逆时针效果不好)，依次敲击剩余三个边，静置约5分钟，放入37度培养箱。

2新方法：这种方法简直是太好了，种的很均匀。先用移液枪将吹打均匀的细胞吸起来，让后将枪头紧贴着孔的一侧壁(注意枪头的尖不要接触孔底)，然后将枪头中的细胞缓缓的打下去，种好之后千万不要摇晃板子，直接放到显微镜下看就可以了，此方法可以说是100%的有效吧。 希望对大家有帮助。

补充：从6孔板到96空板要细胞分散均匀，先用培养基把细胞稀释好，再把培养板放在适当的位置，加入细胞时和加入细胞后不移动培养板;如果空中有的地方没有培养基可吹打，但不要移动培养板，加入细胞后静置20-30分钟再移入培养箱。这样细胞一般都能长的很均匀。当然，前提是细胞消化的很好。