流式细胞术测效靶细胞杀伤实验

做免疫学特别是肿瘤学实验，总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤，老外最常用的是Cr51放射实验，但这个方法在国内的不少地方都不能做，而MTT这个方法又太老了，而且也不准确，那么替代方法就用流式细胞术，又方便，又准确，这也是偶参照老外的方法吧。

1、计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度达到2μM,37度30分钟。

2、拿出后，1000rpm,5min,可隐约看到细胞染成黄色，PBS洗三次。

3、与效应细胞混培，作用4-6小时。

4、将细胞混合液消化取出，洗二次，PI工作液5ul，避光30分钟后上流式。

5、CFSE，PI双阳性的细胞为被杀伤的靶细胞，除以靶细胞总数，即为杀伤率。

注意事项：

1、CFSE及PI的浓度必须注意，宁低勿高，个人感觉，如果标高的话，在4度放一晚好像会好一些。

2、必须设全阴，CFSE单标，PI单标，CFSE＋PI双标并同步化的靶细胞的参照。

3、作用时间不能太长，不要超过8个小时。

我也想做这个，有两篇做这个的文章，有一篇小一点随附件奉上。我用CFSE＋PI双标上机检了一下，发现效果不好，特异性不高。