荧光组织化学与组织细胞荧光分类
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荧光组织化学与组织细胞荧光分类
1852年Stokes发现某些物质在短光波的照射下能发射出一种比激发光长的光波，将这种光称为荧光(fluorescence)。物质(组织标本)被紫外光等短光波照射(激发)后，能发出比原来激发光波长更长的新光波性质(即荧光)称为荧光特性。
当某种物质的电子从外界吸收能量后，由低能级的电子层(内层电子)跃迁到较高能级的电子层，这个过程为激发，跃迁到激发态的电子极不稳定。牛衰期非常短，在短暂的时间(10-8
秒)内将以各种方式释放其能量回到基态。
若以电磁辐射的形式释放所吸收的能量，则会发射出光，这种发射光寿命较短，能为人眼所见，即为荧光；若以热能等形式释放出所吸收的能量则不发光。荧光是冷光，由于光的波长不同，可呈现不同颜色，多为紫色、蓝色、绿色、红色和黄色等。
荧光组织化学技术是利用荧光来鉴定组织细胞内某些生物化学成分，探讨细胞功能状态的常用方法。
（一）自发荧光
自发荧光（auto flurorescence）指不经任何处理的组织细胞成分在短波长光照射下发出荧光，如胶原纤维和弹性纤维呈蓝绿色荧光，卟啉呈红色荧光，维生素A发绿色荧光，细胞内的脂褐素呈棕黄色荧光，蓄积于组织内的某些药物如阿的平和四环素等也能产生荧光。
（二）诱发荧光
诱发荧光（induced fl;uorscence）是指生物胺类物质，如去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺、5―羟色胺和组胺等与一些醛类物质在一定条件下发生环化或缩合反应，产生的缩合物可发出强荧光，称为诱发荧光。诱发荧光法的敏感性较高、特异性强，广泛应用于神经递质、神经内分泌以及神经生物学等研究。
（三）酶促荧光
酶促荧光（enzymtically proodnced fluorescence)系指酶的反应产物能发荧光，如脱氢酶反应中的辅酶I变为还原型辅酶I后，发红色荧光，细胞内脂酶可将不发荧光的二醋酸荧光素转化成发荧光的荧光素，因此可根据产物荧光强度推测酶与酶促反应的情况。
（四）荧光染色
荧光染色门（fluorochrome stain）指某些荧光染料在极低浓度下可与组织细胞的某种成分结合，发出不同波长的荧光，如吖啶橙可与细胞核中DNA结合，发出黄绿色荧光。荧光染色的优点为敏感度高，所需染料浓度低，对细胞毒性小，可作活体染色，观察组织细胞的结构、组成和功能状态。
（五）免疫荧光
免疫荧光（immunofluorescence）是基于免疫组织化学的基本原理将抗原抗体反应和荧光标记技术相结合的一种技术方法。
