基于细胞物理性状的免疫细胞分离方法

1、根据各种细胞比重的差异

（1）自然沉降法

（2）密度梯度离心法

①Ficoll-Hypaque密度梯度离心法：人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞，其体积、形状和比重与其他细胞不同，红细胞和多核白细胞比重较大，为1.092左右，而淋巴细胞和单个核细胞比重为1.075左右。

利用密度在1.077±0.001g/L之间近于等渗的Ficoll-Hypaque混合溶液(称为淋巴细胞分层液)作密度梯度离心时，各种血液成分将按密度梯度重新分布聚集。

血浆和血小板由于密度较低,故悬浮于分层液的上部；红细胞与粒细胞由于密度较大，故沉于分层液的底部；PBMC密度稍低于分层液，故位于分层液界面上,这样就可获得PBMC。

②Percoll密度梯度离心法：Percoll是Pharmacia公司的商品名，成分为硅化聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，为无毒，无刺激的新型密度梯度离心分离剂。聚乙烯吡咯酮包被的硅胶混悬液，它具有易成等渗、粘度低、无毒性、不引起细胞聚集等优点，已得到广泛引用。

由于Percoll在培养基中颗粒大小不等，其在离心过程中自然形成密度梯度，从而将不同密度的细胞分离出来。将1份10×PBS与9份percoll储存液混合，制成等渗Percoll悬液，此悬液被认为是100 % Percoll悬液，其密度为1.1294g/ml。

可通过用PBS(1x)或组织培养液稀释此100%Percoll而获得适宜密度进行细胞分离，因为稀释度与密度线性相关，常用的密度如下：

（3）改变细胞密度法

巨噬细胞能够吞噬铁粉，增加其比重，通过密度梯度离心或磁场将其分离；T细胞能够与绵羊红细胞形成花环，形成的花环复合物比重大，借助密度梯度离心将T细胞分离。

2、根据细胞粘附特性

巨噬细胞能够非特异性粘附于玻璃或塑料表面，根据这种特性可以将巨噬细胞从混合细胞群体中分离；B细胞能够粘附于尼龙棉上，通过尼龙棉柱时被阻滞，从而将其与其他细胞分开。

3、根据细胞对渗透压变化的敏感度

例如红细胞对低渗敏感，通过低渗处理能够裂解红细胞。