师姐独家收藏的分子克隆小技巧

看了标题点进来的，想必是想学得师姐一招半式，好在实验中大展拳脚。不会让大家失望的，今天就谈谈分子克隆的独家经验，可以回复目录查看以往师姐传授的经验。

务必做好对照

一定要做好对照，各种对照，只要你能想到。做的时候千万不要偷懒。比如构建质粒，我最后转化会至少分三个平板，一个涂实验组，一个涂连接过程不加酶的对照（用于估计酶的活性和转化的阳性率），一个涂不加质粒的感受态细胞（用于确定感受态本身没有被污染，或是抗生素没有失效）。

再比如 PCR 产物跑胶的话，一个泳道加产物，一个单独加模板，一个单独加引物，然后至少两个泳道加标准条带。不要怕浪费钱浪费试剂，做不出结果还不知道 troubleshooting 该怎么做而去盲目重复才是最大的浪费，包括时间包括试剂。

同时进行多个实验

有些人一天只能做一个实验，效率真是低得可以。完全可以并行多个实验，比如在等转化的时候顺手配个培养基，跑胶过程中去划个平板，灭菌过程中去看文献等等，整体来看节约时间。

如果你还不不清楚怎么错开做实验，记住这点：多个实验同时进行的时候，其中一个是对时间要求严格，比如转化，另外一两个可以相对简单且不易出错的，比如配培养基。

做好标记

做实验前，先在实验记录本上写好样品全称和对应编号（阿拉伯数字或者字母都行，要简单）。实验过程中需要标记的无数个中间产物都直接用简单编号标记，这样不容易弄混。切记有些数字容易搞错，比如 1 和 7 ，8 和 B 等。

另外，标记日期时请固定用自己习惯的用法。yy/mm/dd 也好， mm/dd/yy 也好， dd/mm/yy 也好，选一个就好，固定下来。

当心实验材料

不同实验室的 LB 配方不一样，氯化钠可能是 5 g/L 可能是 10 g/L。同样是胰蛋白胨，用的不同厂家的，实验结果也会不一样。所以， 重复他人实验请谨慎。做实验最好保持原材料同一厂家，不要随意更换品牌。

此外，LB 培养基每一批的差异非常大，所以最好用大瓶统一配一批，保证自己几个重复实验用的是同一批的培养基。不然的话，数据差异很大。

转化效率

我试过热击转化和电转，电转效率简直逆天。没有条件的话，至少不要用 CaCl2 法了，改用 KCM 。KCM 比 CaCl2 转化率高了一个量级，操作复杂度基本一样。

可以存一些灭菌后的无抗琼脂 LB 固体，需要的时候微波炉热五分钟立马可以加抗生素倒平板。