师姐独家收藏的 DNA 提取小技巧
生物学霸
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很多人都有上面这样的想法吧?其实我当初也这样的,结果呢?怎么也提不好,一提提了好几个月呢。DNA 提取还真是说起来容易、做起来难。
首先大家得明确一点,DNA 是遗传信息的载体,获得高分子量、高纯度的 DNA 是你开展后续测序、杂交等实验的前提。所以,注意了,要高分子量、高纯度哦。我相信肯定有很多人一开始提取的时候,DNA 的浓度是不合格的。
要想做好,其实是有一些技巧的,接下去师姐要开始放大招了。
1. 我有一个习惯,当实验遇到问题的时候,喜欢把实验原理和流程研读几遍,每个环节逐一分析。真正的实验高手不仅仅是会按实验流程操作,他还懂得每一步的原理,这就是格物致知——知其然更知其所以然。
2. 样品和试剂的检查。样品是否反复冻融?样品采集是否合格?试剂是否是现配?这些需要确定,尤其是临床上的样品,可能并非你亲自采集,更要确认其合格。实验中所有的试剂和耗材均要避免核酸酶污染,防止 DNA 降解。
3. 样品量增加是否可以增加 DNA 浓度?资料显示,样品量过多会影响细胞裂解,继而导致 DNA 含量的降低。那么怎么样的量比较合适呢?一个是咨询你的师姐,一个是自己摸索,可以做一个样品量对应的 DNA 浓度曲线。
4. 动作要轻柔。高温水浴时要注意定时且轻柔,千万别指弹 PCR 管,会引起 DNA 机械断裂。使用移液器吹打及其他操作也要轻柔,避免带来伤害,DNA 真的很脆弱。
5. DNA 沉淀是否充分。一般沉淀用的是异丙醇或 70% 乙醇,基本原理就是 DNA 不溶于他们。一个是要控制他们的量和延长沉淀时间,还有一点就是可以将异丙醇或 70% 乙醇预冷,因为 DNA 不溶于异丙醇和乙醇,尤其在低温条件下。
6. DNA 洗涤要小心。倾倒上清、留取沉淀的步骤中一定要缓慢小心进行。
掌握以上几点,我想你提取 DNA 一定圆满成功。如果还有问题,请加我的微信号:biotalk,备注分子克隆,我就会通过。