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TSHR 质粒免疫建立 Graves 眼病的动物模型

相关实验:甲状腺相关眼病动物模型

最新修订时间:

简介

(1) 质粒抽提及定量:大量扩增 DH5α,用质粒抽提试剂盒提取足量质粒 DNA,经紫外分光光度计纯度鉴定及定量后用磷酸盐缓冲液调整为 100 ug/100 ul。

(2) 质粒 DNA 免疫:在小鼠胫前肌相应部位分别注射 100 μg 重组质粒 pcDNA311/hTSHR,免疫后第 3、6 周加强免疫两次。18 周后处死所有小鼠。

观察指标:甲状腺和眼眶组织进行病理学组织检查,甲状腺和眼眶组织分别采用冷冻以及石蜡切片,并检测相关指标。所有采出的血液用 ELISA 法检测血清指标检测。

原理

通过质粒为载体,将 TSHR 转染到动物体内。

用途

以 TSHR 质粒免疫的动物模型成模率不高,但只有在这种建模方法中才出现了明显的甲状腺淋巴细胞浸润以及眼眶组织结构的病理改变。因此,在研究 TAO 病理改变的试验中仍有应用。

材料与仪器

实验动物:

采用 6~8 周龄的雌性 BALB/c 小鼠。

实验仪器:

① 质粒抽提试剂盒;

② 各种甲状腺激素的放射免疫试剂盒。

实验试剂:

① 质粒 pcDNA311;

② 重组质粒 peDNA311/hTSHR;

③ DH5α 宿主菌。

步骤

TSHR 质粒免疫建立 Graves 眼病的动物模型的基本过程可分为如下几步:


A. 质粒抽提及定量:


大量扩增 DH5α,用质粒抽提试剂盒提取足量质粒 DNA,经紫外分光光度计纯度鉴定及定量后用磷酸盐缓冲液调整为 100 ug/100 ul。


B. 质粒 DNA 免疫:


在小鼠胫前肌相应部位分别注射 100 μg 重组质粒 pcDNA311/hTSHR,免疫后第 3、6 周加强免疫两次。18 周后处死所有小鼠。

观察指标:


甲状腺和眼眶组织进行病理学组织检查,甲状腺和眼眶组织分别采用冷冻以及石蜡切片,并检测相关指标。所有采出的血液用 ELISA 法检测血清指标检测。

注意事项

成功率低于腺病毒转染,但是操作简便,利于推广。

来源:丁香实验

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