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甲状腺相关眼病动物模型

实验分类:

实验动物

别名:

Animal models of thyroid-associated ophthalmopathy

最新修订时间:

简介

甲状腺相关眼病动物模型,英文名是 Animal models of thyroid-associated ophthalmopathy。


目前,用于甲状腺相关眼病动物模型的方法主要有 3 种:TSHR 基因转染的腺病毒免疫建立 Graves 眼病的动物模型、TSHR 活化的脾细胞免疫建立 Graves 眼病的动物模型和 TSHR 质粒免疫建立 Graves 眼病的动物模型。


早在 1936 年,Smelser 就采用垂体提取物联合甲状腺切除术诱发豚鼠突眼,实验组 26 只豚鼠中 23 只发生严重的突眼,与对照组比较,实验组鼠眼眶内容物重量增加 40%。但由于该模型与 TAO 发病患者一般甲状腺完整或部分甲状腺功能正常不符,难以用于进一步的研究。


后来采用的 TAO 制模途径包括:


① 同源的促甲状腺激索受体(hyoid-timulating hormone receptor, TSHR)肽免疫;


② TSHR 肽转染的原核细胞免疫、真核细胞免疫;


③ TSHR 基因免疫;


④ TSHR 和 G2s 基因联合免疫;


⑤ 免疫细胞转导免疫及激活的 T 细胞转导免疫等。


理想的 TAO 模型应该具备如下几个或所有特征:


① 血清甲状腺激素水平升高和(或)促甲状腺激素(TSH)水平降低;


② 存在有活性的促甲状腺受体(TSHR)抗体,至少有促甲状腺激素结合抑制性免疫球蛋白(TBII),最好是甲状腺刺激性抗体(TSAb);


③ 甲状腺有相应的病理改变;


④ 淋巴细胞性甲状腺炎;


⑤ 具有甲亢的临床特征, 如体重降低;


⑥ 雌性较雄性动物更易发病;


⑦ 类似于 TAO 的眼部改变,如眼外肌(EOM)结构的破坏、水肿、淋巴细胞浸润和眶脂肪堆积。

原理

根据实验方法不同,对应的原理也有所不同:

TSHR 基因转染的腺病毒免疫建立 Graves 眼病的动物模型的基本原理:

以腺病毒为载体, 将 TSHR 基因转染到小鼠体内, 造成自身免疫反应, 导致眼眶和甲状腺病变。

TSHR 活化的脾细胞免疫建立 Graves 眼病的动物模型的基本原理:

在前述模型的基础上,从脾脏取出活化的免疫细胞,再次进行免疫注射造模,其免疫特征呈放大效应。

TSHR 质粒免疫建立 Graves 眼病的动物模型的基本原理:

通过质粒为载体, 将 TSHR 转染到动物体内。

应用

甲状腺相关眼病动物模型的常用应用领域如下:

(一)应用于免疫机制的研究。

(二)应用于 TAO 病理改变的试验研究。

来源:丁香实验团队

操作方法

TSHR 基因转染的腺病毒免疫建立 Graves 眼病的动物模型

(1) 利用含 TSHR 的 A 亚单位的穿梭质粒构建腺病毒表达的 TSHR 的 A 亚单位。穿梭质粒 pHMCMVTSHR289 用常规 CaCl2 法转化 DH5ax 大肠埃希菌感受态细胞。(2) 重组质粒 pAdHM4CMVTSHR 构建:穿梭质粒 pHMCMVTSHR 和骨架质粒 pAdHM4 均由酶 I-Ceu/PI-Sce 双酶切后,转入 E.coli BJ5183 中, 使两者在其中

TSHR 活化的脾细胞免疫建立 Graves 眼病的动物模型

(1) 质粒抽提及定量:大量扩增宿主菌 E.coli DH5α,用质粒抽提试剂盒提取足量质粒 DNA,经紫外分光光度计纯度鉴定及定量后,用磷酸盐缓冲液调整为 100 μg/200 ul。(2) 基因免疫:免疫前 5 天行预处理,在小鼠胫前肌分 3 点注射 PBS 液 100 μl,然后在小鼠胫前肌相应部位分别注射 100 μg 重组质粒 pcDNA311/hTSHR,免疫后第 3、6 周加强免疫两

TSHR 质粒免疫建立 Graves 眼病的动物模型

(1) 质粒抽提及定量:大量扩增 DH5α,用质粒抽提试剂盒提取足量质粒 DNA,经紫外分光光度计纯度鉴定及定量后用磷酸盐缓冲液调整为 100 ug/100 ul。(2) 质粒 DNA 免疫:在小鼠胫前肌相应部位分别注射 100 μg 重组质粒 pcDNA311/hTSHR,免疫后第 3、6 周加强免疫两次。18 周后处死所有小鼠。观察指标:甲状腺和眼眶组织进行病理学组织检查,甲状腺和眼眶组织分别

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