简介
肽特异性 CD4＋T 细胞的诱导方法是指在体外用多肽进行刺激，制备效应细胞，以便后续进行 CTL 活性的检测。
这是效应性细胞毒性 T 细胞的体外诱导方法的一种方法，除多肽刺激制备效应性细胞毒性 T 细胞方法外，还可用多肽孵育后 TAP 缺陷细胞刺激、多肽孵育后 DC 刺激法制备效应性细胞毒性 T 细胞。
原理
肽特异性 CD4＋T 细胞的诱导方法的基本原理是指在体外用多肽进行反复刺激，制备效应细胞，以便后续进行 CTL 活性的检测。
材料与仪器
器材：
离心机、细胞培养箱等
试剂：
① Ficoll-HyPaque
② 含血清的培养基
③ 无血清培养基
④ 含 5% FBS 的 PBS
⑤ 多肽或 APC
⑥ 丝裂霉素 C
步骤
肽特异性 CD4＋T 细胞的诱导方法的基本流程如下：
1．新鲜采集的外周血采用 Ficoll-Hypaque 密度梯度离心法分离、获得 PBMC。PBMC 用含 5% FBS 的 PBS 洗涤 3 次后，重悬于含血清的培养基，培养。或进一步分离、获得 CD4＋T 细胞，培养。
2．用无血清培养基洗涤分离、获得的 PBMC 或 DC，用无血清培养基重悬细胞后，加入 10～20 μg/ml 多肽，37 ℃ 孵育 2 小时。无血清培养基洗涤后，y 射线照射或用丝裂霉素 C 处理，用作 APC。
3．分离、培养的 PBMC 或 CD4＋T 细胞用 2～20 μg/ml 多肽或 APC 刺激。1 周后，更换一半培养基，按 APC 与 PBMC3：1～1:3 的比例加入 APC 进行再次刺激。反复共刺激 2～3 个循环，每个循环约 1 周。
＊注：这里的比例是指 APC 与 PBMC 的比例从 3:1 开始，逐渐增加 PBMC 的比例，至 APC 与 PBMC 的比例为 1:3，以下同。
4．再次刺激后第 2 天，加入 10～120 IU/ml IL-2。每 3 天补充一次 IL-2。
5．最后一次刺激终止后，测定细胞增殖情况、检测细胞因子释放。
来源：丁香实验
