简介
造血干细胞是迄今为止研究得最为透彻的成体干细胞，可以用两个特征来定义造血干细胞：一是可以进行自我更新，二是可产生所有血细胞类型。经过近 50 年的研究，人们对造血干细胞的了解不断深入，造血干细胞早已应用于临床，用于治疗癌症、血液疾病以及一些免疫系统疾病，同时有分化成除血细胞以外的细胞类型的能力，如神经细胞、肌肉细胞以及肝细胞等，与其他成体干细胞相比有不可比拟的优势。
材料与仪器
器材：
① 2 把尖解剖剪：长 10 cm，两个 Perry 镊：长 12.5 cm；注射器
② 200 目筛网
③ 100 mm 培养皿、15 ml 离心管
④ 离心机、培养箱
⑤ 7 号针头、4 号半针头
试剂：
① PEB 缓冲液 含有 0.5% 牛血清蛋白（BSA）和 2 mmol/L EDTA 的 PBS
② HSC medium STEMSPAN+50 ng/ml TPO + 50 ng/ml FL + 50 ng/ml SCF + 10 ng/ml IL-3 + 10 ng/ml IL-6 + 10% FBS
③ PBS（1000 ml）：0.57 g Na，HPO4 ＋ 8 g NaCl ＋ 0.25 g KCl ＋ 0.25 g KH2PO2
④ 肝素
⑤ 甲基纤维素
⑥ Ficoll 淋巴细胞分离液（d ＝ 1.077）
步骤
造血干细胞的制备的基本过程可分为如下几步：
1. 肝素抗凝的脐带血按 1:1 的比例与 PBS 混匀。
2. 再按 4:1 比例与 0.5% 甲基纤维素混匀，静置沉淀 45 分钟。
3. 吸出上清，置于 50 ml 离心管中，1500 r/min 离心 5 分钟。
4. 弃上清，加 5 ml 的 PBS 重悬细胞。
5. 缓慢沿管壁加入 5 ml 细胞悬液到 5 ml 淋巴细胞分离液（Ficoll），1500 r/min 离心 20 分钟，分离出单个核细胞。
6. 收集薄膜层的单个核细胞，PBS 洗涤，PBS 重悬细胞计数备用。
7. 利用分选仪器进行 CD34 细胞分选。
来源：丁香实验
