简介
骨髓间充质干细胞（BMSCs）广泛存在于结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量最为丰富，由于骨髓是其主要来源，因此统称为骨髓间充质干细胞。
目前体外用于分离纯化 BMSCs 的方法主要有 5 种：
① 利用 BMSCs 与培养底物的黏附性采用的全骨髓贴壁筛选法；
② 根据 BMSCs 低密度特性采用的密度梯度离心法；
③ 根据 BMSCs 的细胞表面标志，采用相应的荧光素标记抗体进行染色的流式细胞仪分选法；
④ 根据 BMSCs 表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合而采用的免疫磁珠分选法；
⑤ 利用一种独特的培养装置从骨髓中筛选 BMSCs 的特制培养板筛选法。全骨髓贴壁筛选法所获得的细胞数量多，增殖速度快，但其纯度有限，成分复杂。
材料与仪器
器材：
① 2 把尖解剖剪：长 10 cm，两个 Perry 镊：长 12.5 cm；注射器
② 200 目筛网
③ 100 mm 培养皿、15 ml 离心管
④ 离心机、培养箱
⑤ 7 号针头、4 号半针头
试剂：
① 材料：6～8 周龄雄性 Sprague-awley 大鼠
② 促性腺激素
③ PBS、EDTA 溶液、乙醇
④ MSC medium：82% α-MEM ＋ 15% FBS＋1% NEAA＋1% L-Glutamine ＋ 1% Streptomycine-Penicillin + 1 ng/ml BFGF
步骤
全骨髓贴壁筛选法制备骨髓间充质干细胞的基本过程可分为如下几步：
1. 采取颈椎脱臼法处死小鼠，将鼠体浸泡于 750 ml/L 乙醇中 3～5 分钟。
2. 取一套原代器械包尽量在无菌条件下取出完整股骨，清除周围附着组织。
3. 将股骨置于超净工作台中 100 mm 培养皿中，再取一套原代器械包置于超净工作台中。
4. 取 3 个 100 mm 培养皿加入 10 ml 含 2% SP 的 PBS，将股骨反复清洗 3 遍后置于一个新 100 mmI 皿中。
5. 用解剖剪剪掉股骨一侧骨骺部分，用吸有培养液的注射器（7 号针头）冲出骨髓。
6. 吸取冲出骨髓的培养液，注射器挤压使其通过 4 号半针头制成单细胞悬液。
7. 将所得细胞悬液过 200 目筛网，移入一 15 ml 离心管中；1000 r/min，10 分钟离心，弃上清。
8. 加入培养液重悬细胞并调整细胞密度，以合适的密度接种于培养瓶中，标记为原代细胞（P。）。
9. 置 37 ℃、5% CO2 、饱和湿度的培养箱中静置培养。
10. 于 72 小时后首次更换培养液，去除未黏附细胞，以后每 3 天更换 1 次培养液。
11. 待细胞长至 80%～90% 融合时传代。
来源：丁香实验
