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大鼠ES的建系

相关实验:大鼠ES细胞技术

最新修订时间:

简介

胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)是指从桑椹胚或附植前囊胚内细胞团分离的一种多能性干细胞,是最经典的多能性干细胞,它位于个体发育的顶端,具有发育的全能性,能够分化为组成机体的所有类型的细胞,进而形成机体的任何组织和器官,并具发育成完整个体的能力。

材料与仪器

器材:

① 无菌手术器械
② 显微镜
③ 注射器
④ 培养箱、培养皿

试剂:

① 鼠
② trypsin/EDTA
③ MEF 培养基培养液
④ PBS、麻醉剂、以 70% 乙醇等

步骤

大鼠 ES 建系的基本过程为:

1. 获取自然受精后 4. 5 天的 DA 大鼠子宫;

2. 用胚胎操作液 M2 冲出植入前的 DA 大鼠囊胚;

3. 利用倒置显微操作系统去掉囊胚透明带;

4. 移入提前加有大鼠胚胎干细胞培养液并铺有滋养层细胞的四孔板上;

5. 培养 3 天后内细胞团贴壁生长,形成克隆突起;4~6 天时挑取细胞克隆,使用添加了 10% 胎牛血清的 0. 05% 胰酶消化为单细胞后,移入新的四孔板上生长;

6. 此后每天更换新的大鼠胚胎干细胞培养液,每 3 天传代一次;大鼠胚胎细胞的生长状态既有贴壁生长又有悬浮生长,需要在换液时收集培养液,将沉淀细胞传代于新的培养皿上。

来源:丁香实验

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