简介
胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）是指从桑椹胚或附植前囊胚内细胞团分离的一种多能性干细胞，是最经典的多能性干细胞，它位于个体发育的顶端，具有发育的全能性，能够分化为组成机体的所有类型的细胞，进而形成机体的任何组织和器官，并具发育成完整个体的能力。
材料与仪器
器材：
① 无菌手术器械
② 显微镜
③ 注射器
④ 培养箱、培养皿
试剂：
① 鼠
② trypsin/EDTA
③ MEF 培养基培养液
④ PBS、麻醉剂、以 70% 乙醇等
步骤
大鼠 ES 建系的基本过程为：
1. 获取自然受精后 4. 5 天的 DA 大鼠子宫；
2. 用胚胎操作液 M2 冲出植入前的 DA 大鼠囊胚；
3. 利用倒置显微操作系统去掉囊胚透明带；
4. 移入提前加有大鼠胚胎干细胞培养液并铺有滋养层细胞的四孔板上；
5. 培养 3 天后内细胞团贴壁生长，形成克隆突起；4～6 天时挑取细胞克隆，使用添加了 10% 胎牛血清的 0. 05% 胰酶消化为单细胞后，移入新的四孔板上生长；
6. 此后每天更换新的大鼠胚胎干细胞培养液，每 3 天传代一次；大鼠胚胎细胞的生长状态既有贴壁生长又有悬浮生长，需要在换液时收集培养液，将沉淀细胞传代于新的培养皿上。
来源：丁香实验
