简介
胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）是指从桑椹胚或附植前囊胚内细胞团分离的一种多能性干细胞，是最经典的多能性干细胞，它位于个体发育的顶端，具有发育的全能性，能够分化为组成机体的所有类型的细胞，进而形成机体的任何组织和器官，并具发育成完整个体的能力。
材料与仪器
器材：
① 无菌手术器械
② 显微镜
② 注射器
③ 培养箱、培养皿
试剂：
① 鼠
② trypsin/EDTA
③ MEF 培养基培养液
④ PBS、麻醉剂、以 70% 乙醇等
步骤
胚胎成纤维细胞（MEFs）的制备的基本过程为:
1) 将见栓 12.5～13.5 天的孕鼠脱颈处死，以 70% 乙醇浸泡 3～5 分钟。
2) 将孕鼠放入超净工作台中，用无菌的眼科剪剖开腹部，取出子宫角，在盛有 70% 乙醇的培养皿中简单冲洗，迅速放入含有 20 ml PBS 的 100 mm 培养皿中洗涤 3 遍。
3) 用无菌的眼科镊子将胚胎从子宫角中取出，放入盛有 PBS 的培养皿中，洗去血渍。去除胎鼠的头、四肢及内脏，然后将胚胎分别转移至 35 mm 的培养皿中，用无菌的眼科剪剪碎胚胎。
4) 加入 0.5 ml 0.25% 的 trypsin/EDTA，并将组织块转移至 1.5 ml 离心管，在 37 ℃ 培养箱中放置消化 15 分钟，使得组织有效分解，立即加入 0.5 ml MEF 培养基终止胰酶消化。
5) 用枪头吹散组织块，然后将上清液及组织块转移至 100 mm 培养皿中，每个皿中添加 7 ml 培养基，充分混匀细胞，37 ℃，5% CO2 培养过夜。
6) 第二天更换培养液，去除没有贴壁的细胞及组织块。待细胞长至 90% 汇合时，MEFs 可以冻存，记为 P1 代，或者可以 1:3 传至 3 个 100 mm 培养皿，也可以用丝裂霉素 C 处理做饲养层细胞。
来源：丁香实验
