简介
正常情况下，ES 细胞的 AKP 标记呈阳性；而当饲养条件不合适造成 ES 细胞发生分化时，AKP 标记呈阴性。AKP 染色常用染料是固蓝、固绿 B 盐或萘酚等，检测 ICM、ES、PGC 细胞反应为阳性。
材料与仪器
器材：
① 载玻片
② 染缸
试剂：
① PBS
② BCIP/NBT 碱性磷酸酯酶显色试剂盒（碧云天）
步骤
AKP 染色鉴定小鼠干细胞的基本过程为：
1. 用含 Ca2＋和 Mg2 的 PBS 洗 3 遍。
2. 4% 多聚甲醛固定 30 分钟以上。
3. PBS 冲洗 3 次。
4. 按比例加入各溶液 ［碱性磷酸酯酶显色缓冲液 3 ml＋BCIP 溶液（300x）10 μl＋NBT 溶液（150x）20 μl＋BCIP/NBT 染色工作液 3.03 ml］，混匀后配成 BCIP/NBT 染色工作液，确保能充分覆盖样品。
5. 室温避光孵育 5～30 分钟或更长时间（可长达 24 小时），直至显色至预期深浅。
6. PBS 洗 3 遍后，存放于 PBS 溶液中保存，拍照。
来源：丁香实验
