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小鼠胚胎干细胞的鉴定

实验分类:

实验动物

最新修订时间:

简介

干细胞(stem cells)是具有自我更新能力的多潜能细胞。根据其发育潜能,干细胞被分为 3 类,即:全能干细胞(totipotent stem cell),多能干细胞(pluripotent stem cell)和单能干细胞(unipotent stemcell)。在适宜的条件下,动物多能干细胞具有分化为身体各种细胞的潜能,在基础研究、医疗、药物研发等方面具有不可估量的应用价值。与此同时,干细胞技术也成为生物技术领域最具有发展前景的前沿技术。

小鼠 ES 细胞的鉴定主要围绕 ES 细胞的形态、核型、分化潜能和特异性染色等方面进行。

来源:丁香实验团队

操作方法

形态学观察鉴定小鼠干细胞

小鼠 ES 细胞的形态特点为圆形或扁圆形,表面平滑,体积较小,核质比大,有一个或多个凸起的核仁结构。经培养后紧密聚集,细胞之间界限不清,形成岛状,巢状群体生长状态,集落边缘整齐,与滋养层细胞界限分明且色泽深亮,克隆的边缘可以看到比较清晰的单个细胞。多次传代消化或改变培养基的成分,如降低血清浓度、去除 LIF 或碱性 FGF 等某些生长因子时,悬浮培养形成的细胞团开始出现松散,球形的边缘可以清楚地看

核型分析鉴定小鼠干细胞

正常的二倍体核型特征是 ES 细胞全能性的基础,因此需要对所建立的 ES 细胞系的核型进行鉴定分析。

AKP染色鉴定小鼠干细胞

正常情况下,ES 细胞的 AKP 标记呈阳性;而当饲养条件不合适造成 ES 细胞发生分化时,AKP 标记呈阴性。AKP 染色常用染料是固蓝、固绿 B 盐或萘酚等,检测 ICM、ES、PGC 细胞反应为阳性。

特异标记免疫荧光实验鉴定小鼠干细胞

在 ES 细胞及早期胚胎卵裂球的细胞表面均有特定的抗原,如多能性相关转录因子 Oct4,Sox2,Nanog 和早期胚胎阶段特异性细胞表面抗原 SSEA-1 以及 SSEA 抗原相关的胚胎性标志 ECMA-7 等,这些均是未分化状态 ES 细胞的检测指标。因此,常用单克隆抗体的间接免疫荧光法检测小鼠 ES 细胞表面抗原,作为发育全能性的标志。

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