简介
正常的二倍体核型特征是 ES 细胞全能性的基础，因此需要对所建立的 ES 细胞系的核型进行鉴定分析。
材料与仪器
器材：
① 载玻片、镊子、离心管、移液管、吸管、35 mm 培养皿（Corning，430165）
② 培养箱
试剂：
① Demecolcine（Sigma，D6165）
② Giemsa（Sigma，G4507）
③ NaH2PO（Sigma，S6566）、Na2HPO，（Sigma， S5136）
④ 甲醇、冰醋酸
步骤
核型分析鉴定小鼠干细胞的基本过程为：
1．将需要做核型分析的 ES 传代，通常用一个 35 mmI 皿的细胞做核型，在传代后 25～40 小时向培养皿中加入 0.2 μg/ml democolcin，继续培养 1～2 小时。
2．取出培养皿，用标准传代的消化方法将其消化成单细胞悬液，1200r/min 离心 10 分钟，弃上清，注意：上清要吸得彻底些。
3．加入事先预热至 37 ℃ 的 0.56% KC1 低渗液 4 ml，用滴管吹打成单细胞悬液（较剧烈），37 ℃ 低渗处理 15～20 分钟。
4．配 10 ml 固定液，4 ℃ 冰箱预冷。
5．加入 1 ml 预冷的固定液，轻轻吹吸（用滴管从上到下吹气泡 10 次）后离心 1200 r/min，10 分钟。
6．弃上清，加 4 ml 新鲜预冷的固定液，轻轻吹打成单细胞悬液，放入 4 ℃ 冰箱固定 30 分钟以上。
7.1200 r/min 离心 10 分钟。
8．配 8 ml 固定液，4 ℃ 冰箱预冷；重复步骤 6-8，再固定两次。
9．弃上清，加入少量固定液（0.2～0.6 ml）重悬细胞。
10．取一洁净载玻片（浸泡在无水乙醇中，用前用干净绸布擦干，作好标签），用滴管吸取细胞悬液于载玻片垂直上方 50 cm 以上处滴片，将载片倾斜放置，自然晾干（1 小时以上）。
11．将载玻片倒扣（染色体面向下）于染色盒内，于载玻片和盒面之间加入染液（用滴管贴载片边缘轻轻加入），室温染色 1 小时。
12．将载玻片取下，于自来水中冲洗 30～60 秒，再用蒸馏水冲洗 5 秒钟，自然晾干。
13．显微镜下观察，计数。
来源：丁香实验
