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动物胚胎冷冻保存技术玻璃化法

相关实验:动物胚胎冷冻保存技术

最新修订时间:

简介

动物胚胎冷冻保存技术玻璃化法是利用某些冷冻剂的物理学特性,通过急速降温使其由液态转化为外形类似玻璃状态的稳定的非晶体化固体状态。

原理

动物胚胎冷冻保存技术玻璃化法的基本原理是玻璃化液的高浓度渗透性抗冻保护剂可以通过细胞膜渗透,瞬间使细胞内外抗冻保护剂的浓度达到平衡,从而抑制降温过程中细胞内冰晶的生成。图解示意 Kasai 等发明的一步玻璃化冷冻保存法和 Zhu 等建立的二步玻璃化冷冻保存法。

材料与仪器

器材:


0.25 mL 细管、冷冻仪、液氮罐。


试剂:


①玻璃化冷冻液 7.5 mol/L EFS40(在 mPBS 液的基础上添加 40%-乙二醇 (v/v)、 18% 聚庶糖 (w/v) 和 0.3 mol/L 蔗糖);


②10%(v/v) 乙二醇;


③PBS。

步骤

动物胚胎冷冻保存技术一步玻璃化法的基本过程可分为如下几步:


A. 将胚胎直接装入含有玻璃化溶液的塑料细管中,在室温下平衡 2 分钟。


B. 然后直接投入到液氮中保存。


动物胚胎冷冻保存技术二步玻璃化法的基本过程可分为如下几步:


A. 先用低浓度乙二醇 (10%, v/v) 溶液在室温下将胚胎预处理 5 分钟。


B. 然后再将其移到含有玻璃化冷冻液 (EFS40) 的细管中平衡 0.5 分钟。


C. 最后将细管封口投入液氮中冷冻保存。

来源:丁香实验

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