胚胎冷冻保存
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胚胎冷冻对活组织和细胞进行冷冻保存时,冷冻过程将可能对细胞造成损伤.
主要的损伤机制包括:
①溶液效应造成化学损伤.在冷却速度较慢的情况下,胞外溶液中水分大量结冰.与海水中的冰山主要是淡水形成而盐分很低的情况相类似,细胞外溶液结成的冰中溶质很少,这样就造成胞外溶液浓度提高,从而使胞内水分大量渗出,细胞强烈收缩,并使细胞长时间处于高浓度溶液中;
②细胞内结冰造成物理损伤.冷却速度过快时,胞内水分来不及通过细胞膜向外渗出,胞内溶液过冷而结冰,从而造成物理损伤.另外,在复温(解冻)过程中,如果复温速率不当也可能引起细胞内结冰(重结冰)而损伤;
③细胞渗透压异常损伤.抗冻保护剂的加入或去除不当,则会引起细胞渗透压明显变化、细胞内外电解质浓度改变等,从而造成细胞或胚胎损伤.为解决上述问题,发展出了各种冷冻方法,目前应用比较广泛的是程序冷冻法和玻璃化冷冻法.