动物胚胎冷冻保存技术一步冷冻法

动物胚胎冷冻保存技术一步冷冻法是利用非渗透性的解冻保护剂中和渗透性的冷冻保护剂，如用蔗糖除去甘油。该方法可以在室温进行胚胎脱水而不需要特殊的降温程序，冷冻过程耗时短，解冻后可直接用于移植。

器材：

【0.25 mL 细管】、【冷冻仪】、【液氮罐】。

试剂：

①甘油;

②PBS ;

③PBSS（含 20%NCS 的 PBS）；

动物胚胎冷冻保存技术一步冷冻法的基本过程可分为如下几步：

A. 将胚胎依次放入含 0. 7 mol/L 甘油的 PBS 和含 1.4 mol/L 甘油的 PBSS 中，分别平衡 7-10 分钟；

B. 然后将胚胎装入 0.25 mL 细管的中部，并在细管两端加入解冻液（0.5 mol/L 蔗糖），每端解冻液和含有胚胎的中间段均用气泡隔开；

C. 将细管放入预先冷却至-7 °C 的冷冻仪中平衡 10 分钟；

D. 待以 0.3 °C/min 的速度降温至-35 °C 后，将细管投入液氮保存；