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动物胚胎冷冻保存技术常规缓慢冷冻法

相关实验:动物胚胎冷冻保存技术

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简介

动物胚胎冷冻保存技术常规缓慢冷冻法,是最早建立的胚胎冷冻方法,该方法的优点是脱水完全、细胞内冰晶形成少、缺点是比较费时,且保护剂对胚胎作用时间长、毒性大,并需要专门的程序降温。

材料与仪器

器材:


0.25 mL 细管、冷冻仪、液氮罐。


试剂:


①胚胎;


②甘油 ;


③PBS ;


④PBSS(含 20%NCS 的 PBS)。

步骤

动物胚胎冷冻保存技术常规缓慢冷冻法的基本过程可分为如下几步:


A. 将胚胎依次放入含 0. 7 mol/L 甘油的 PBS 和含 1.4 mol/L 甘油的 PBSS 中,分别平衡 7-10 分钟;


B. 然后将胚胎装入 0.25 mL 细管的中部,并在细管两端加入冷冻液,每端冷冻液和含有胚胎的中间段均用气泡隔开;


C. 将细管放入预先冷却至-7 °C 的冷冻仪中平衡 10 分钟;


D. 待以 0.3 °C/min 的速度降温至-35 °C 后,将细管投入液氮保存。

来源:丁香实验

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