简介
Ficoll-hypaque 密度梯度离心法，又称蔗聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法，该方法主要用于小量制备中性粒细胞。
原理
Ficoll-hypaque 密度梯度离心法分离中性粒细胞的基本原理是利用右旋糖酊加速红细胞沉降，将富含白细胞的上层液用淋巴细胞分层液进一步分离，使粒细胞沉于管底，从而使之与淋巴细胞和单核细胞分离。再用低渗裂解法裂解红细胞后，即得到中性粒细胞。
材料与仪器
试剂：
(1)6% 右旋糖酊生理盐水。
(2) 蔗聚糖-泛影葡胺分层液 (密度为 1.077)。
(3)0.83%NH4C1 溶液：＜0.83 g NH4C1, 0.1 g KHCO3.0.0037 gEDTA-2Na, 蒸馏水加至 100 mL
(4)0.1% 白明胶 Hank's 溶液。
(5) 肝素
仪器：
(1) 离心机
(2) 超速离心管。
步骤
蔗聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离中性粒细胞的基本过程可分为以下几步：
1. 红细胞沉降：取 4 mL 肝素抗凝血，加 l mL6% 右旋糖酊生理盐水 (相当于 1/4 体积抗凝血)，混匀后在室温斜置 30 ~45 min。
2. 分离中性粒细胞：取上层按 1：1 比例叠加到蔗聚糖-泛影葡胺分层液顶部。 500 r / min 离心 30 min, 弃上清。
3. 裂解红细胞：将细胞沉淀用 0. 83% NH4C1 溶液低渗法破除红细胞。
4. 收集中性粒细胞：离心洗涤细胞后，将细胞重悬于 2~3 mL0. 1% 白明胶 Hank's 溶液中，计数并调整细胞至所需浓度。
5. 活力及纯度测定：取细胞液涂片，分别作台盼蓝拒染试验和 Giemsa 染色鉴定其 存活率与纯度。
来源：丁香实验
