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中性粒细胞分离

实验分类:

免疫学实验

最新修订时间:

简介

作为天然免疫细胞的重要组成部分,中性粒细胞的作用在炎症发生的过程中发挥着重要作用。要探讨其机制,常需分离小鼠腹腔以及外周血中性粒细胞和人外周血中性粒细胞进行研究。

但是,若未经诱导,从一只小鼠腹腔内能分离到的中性粒细胞少于106,因此,若需要制备大量中性粒细胞,则需要进行诱导。

目前,诱导分离中性粒细胞的方法有 Percoll 密度梯度分离法和蔗聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法等。

原理

Percoll 密度梯度分离法分离中性粒细胞的基本原理是利用 Percoll 渗透压低(<20 mOsmol/kgH20),黏度小,形成的梯度非常稳定,可高达 1.3 g/mL 密度。采用预先形成的密度梯度可在低离心力(200~1000 g )于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于 Percoll 扩散常数低,所形成的梯度十分稳定。而且 Percoll 不穿透生物膜,对细胞无毒害,因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒,还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。
蔗聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离中性粒细胞的基本原理是利用右旋糖酊加速红细胞沉降,将富含白细胞的上层液用淋巴细胞分层液进一步分 离,使粒细胞沉于管底,从而使之与淋巴细胞和单核细胞分离。再用低渗裂解法裂解红 细胞后,即得到中性粒细胞。该方法主要用于小量制备中性粒细胞。

来源:丁香实验团队

操作方法

Percoll 密度梯度分离法分离中性粒细胞

Percoll 密度梯度分离法分离中性粒细胞对细胞无毒害,广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒,还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。

Ficoll-hypaque 密度梯度离心法(分离中性粒细胞)

Ficoll-hypaque 密度梯度离心法,又称蔗聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法,该方法主要用于小量制备中性粒细胞。

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