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琥珀酸脱氢酶染色技术

相关实验:组织学基本技术

别名:succinic dehydrogenase (SDH) stain

最新修订时间:

简介

琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase)是线粒体的一种标志酶,其作用是从底物将氢传递给受氢体的酶系。

原理

琥珀酸脱氢酶染色技术的基本原理是琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase)是线粒体的一种标志酶,其作用是从底物将氢传递给受氢体的酶系,经氢传递系统使受氢体还原显色,从而达到染色定位的目的。

材料与仪器

器材:10 ml 染缸、冰冻切片。

试剂:

① 福尔马林钙(FCa)

② 80% 乙醇


③ 0.1 mol/L 磷酸缓冲液(a.磷酸氢二钠 3.58 g,加水 100 ml;b.磷酸二氢钠 1.56 g,加水 100 ml。将 a 加入 b 中即成)


④ 0.1 mol/L 琥珀酸钠


⑤ 氯化硝基四氮唑蓝(NBT)

⑥ 二甲基亚砜(DMSO)

⑦ 丙二酸钠

⑧ 蒸馏水

⑨ 生理盐水

⑩ 甘油或甘油明胶封片

⑪ 作用液(0.1 mol/L 磷酸缓冲液(pH 值 7.6)2.5 ml,0.1 mol/L 琥珀酸钠 2.5 ml,NBT / DMSO 5 mg / 2.5 ml,混合)

步骤

琥珀酸脱氢酶染色技术的基本过程可分为如下几步:

A. 切片进入作用液 15~35 min(室温)。

B. 生理盐水洗。

C. FCa 固定 10 min。

D. 80% 乙醇 5 min。

E. 蒸馏水洗。

F. 甘油明胶封片。

注意事项:对照片制作:在作用液中加入丙二酸钠(3.7 mg/ml)。

注意事项

1. NBT/DMSO 5 mg/2.5 ml 应现用现配

来源:丁香实验

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