简介
琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase)是线粒体的一种标志酶,其作用是从底物将氢传递给受氢体的酶系。
原理
琥珀酸脱氢酶染色技术的基本原理是琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase)是线粒体的一种标志酶,其作用是从底物将氢传递给受氢体的酶系,经氢传递系统使受氢体还原显色,从而达到染色定位的目的。
材料与仪器
器材:10 ml 染缸、冰冻切片。
试剂:
① 福尔马林钙(FCa)
② 80% 乙醇
③ 0.1 mol/L 磷酸缓冲液(a.磷酸氢二钠 3.58 g,加水 100 ml;b.磷酸二氢钠 1.56 g,加水 100 ml。将 a 加入 b 中即成)
④ 0.1 mol/L 琥珀酸钠
⑤ 氯化硝基四氮唑蓝(NBT)
⑥ 二甲基亚砜(DMSO)
⑦ 丙二酸钠
⑧ 蒸馏水
⑨ 生理盐水
⑩ 甘油或甘油明胶封片
⑪ 作用液(0.1 mol/L 磷酸缓冲液(pH 值 7.6)2.5 ml,0.1 mol/L 琥珀酸钠 2.5 ml,NBT / DMSO 5 mg / 2.5 ml,混合)
步骤
琥珀酸脱氢酶染色技术的基本过程可分为如下几步:
A. 切片进入作用液 15~35 min(室温)。
B. 生理盐水洗。
C. FCa 固定 10 min。
D. 80% 乙醇 5 min。
E. 蒸馏水洗。
F. 甘油明胶封片。
注意事项:对照片制作:在作用液中加入丙二酸钠(3.7 mg/ml)。
注意事项
1. NBT/DMSO 5 mg/2.5 ml 应现用现配
来源:丁香实验