流式细胞法检测细胞凋亡

流式细胞法检测细胞凋亡的基本原理是经染色后每一细胞结合的 DNA 特异染料（PI）与其 DNA 含量成正比，而细胞受激发后发射的荧光强度与结合 PI 的量成正比。利用此特点流式细胞仪可将处于不同细胞周期的细胞分开。凋亡细胞的染色质凝聚，DNA 被裂解，在制备样品过程中，低分子的 DNA 片段扩散，加之凝聚的染色质排斥染色，致使凋亡细胞的可染性降低，在直方图的 Go/G1 期峰前出现亚二倍体区（图10-3）。

器材：

① 微量移液器吸头

② 400 目的筛网

③ 10 mL 离心管

④ 微量移液器

⑤ 流式细胞仪

⑥ HeLa 细胞。

试剂：

① 凋亡诱导剂（根据情况自定）

② 0.02％ EDTA

③ PBS（pH7.2）

④ PI 染液

（100 mg/L 的 PI，1.0％ 的 Triton X-100，0.9 g/L 的 NaCl。4 ℃ 保存）

⑤ 100％ 乙醇（冰箱保存）

⑥ RNase（10 mg/mL）

流式细胞法检测细胞凋亡的基本过程可分为如下几步：

A 收集细胞。

B 冷 PBS 洗 2 次后制成 2 x 106 个/mL 细胞悬液。

C 加入冷 100％ 乙醇（乙醇:细胞悬液＝7:3），4 ℃ 固定 12 h 以上。

D 冷 PBS 洗 2 次。

E 用 500 μl PBS 重新悬浮细胞，加入 RNase A（终浓度为 0.1 mg/mL）。

F 400 目尼龙网过滤。

G 加 PI 800 μl，4 ℃ 保持 30 min。

H 流式细胞仪分析。