材料与仪器
合适的激酶 目标蛋白 制备有蛋白质阵列的玻片
ATP Dektol 显影剂 干燥剂 激酶缓冲液 照相用定影剂 NTB-2 放射自显影感光乳液 冲洗缓冲液
β-射线盒 离心机 孵育箱 光学扫描显微镜
ATP Dektol 显影剂 干燥剂 激酶缓冲液 照相用定影剂 NTB-2 放射自显影感光乳液 冲洗缓冲液
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步骤
![① 用缓冲液冲洗阵列玻片3 次 ，每 次 lOmin。 ② 用激酶缓冲液将玻片冲洗1 次 ， l O m i n 。 ③ 将玻片与含有lO O ^nol/L A T P 的激酶缓冲液共同孵育l 〇 m in 。 ④ 用激酶缓冲液将玻片冲洗1 次 ， l 〇 m i n 。 ⑤ 每种激酶用200沁的激酶缓冲液稀释，缓冲液中含有lO O ^m o l/L 的 A T P 和 7 .4 X 1 0 5Bq (20pC i) 的 [7 -33P ] A T P 。 ⑥ 将激酶溶液加到每个阵列后，放 入 P C 200 C 〇 verW e l l 孵 育 箱 （ 见方案⑪ 步骤 ⑥），室温孵育玻片lh。 ⑦ 用缓冲液冲洗玻片6 次 ，每 次 5mi n。 ⑧ 用 不 含 Triton X -100的缓冲液冲洗玻片2 次 ，每 次 5m i n。 ⑨ 用蒸馏水冲洗玻片3 次 ，每 次 3min。 ⑩ 200g 离心，以去掉残余水分。 若没有合适的转子配置，也可以采用通氮气流的方法来干燥玻片。 检测放射性印记 ⑪ 为了显示放射性衰变，于 45°C 条件下，将 N T B _放射自显影感光乳液放人暗 房内。 ⑫ 在暗室中，将玻片浸入感光乳胶内， 3s 后取出，室温条件下，经 4h 垂直悬挂晾干。 使用浸片器可以使这一步的操作得到简化。 ⑬ 将玻片封在一个放有干燥剂的/5-射线盒中， 4°C 暗处曝光4〜10d 。 在显影前，将玻片置于室温条件下，因为在温度较低的情况下打开盒 子 ，感光乳液容易起泡或流失。 实验提不：为了避免玻片被干燥剂所带的灰尘污染，可将玻片放人一 个可透过性的容器中或将其包裹在几个K i m w i p e 纸巾中。 ⑭ 玻片的显影。将其依次浸入： Dektol显影剂中2min H 2O 中 IOs 定影剂中5min H.2 O 中 5min ⑮ 用光学扫描显微镜观察放射性印记。](http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2016/07/A1469435440133x87w7vvpbdpng_small.jpg)
来源：丁香实验
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