材料与仪器
通过电泳分离的凝胶内蛋白质
乙酸 显影液 固定液 甲醇 硫酸银水溶液 终止反应液
塑料皿 摇床
乙酸 显影液 固定液 甲醇 硫酸银水溶液 终止反应液
塑料皿 摇床
步骤
1.将凝胶放在塑料皿中(用一次性的塑料皿或者彻底洗过的塑料皿),加入足量的固定液以覆盖凝胶。固定 20 min, 并轻轻摇动。
2.弃掉固定液,加人足量的 50% 甲醇覆盖胶,轻轻摇动 10 mm。
3.弃掉甲醇,加人去离子水,再摇动 10 min。
4.弃掉去离子水,在 0.02% 的硫代硫酸钠中浸泡凝胶 1min。
5.用去离子水洗凝胶 2 次,每次 1 min。
6.将凝胶浸到冰冷的0.1% 硝酸银溶液中,在 4°C 孵育 20 min。
7.用去离子水洗凝胶 2 次,每次 1 min。
8.将凝胶浸到显影液中,剧烈摇动塑料皿,直到达到理想的染色效果(见步骤⑨)。如果显影液变黄,弃掉之,另换新鲜的显影液。
实验提示:在显影的过程保持显影液透明非常关键。
9.当染色达到理想的程度时,用终止液代替显影液,停止显色。
10.将银染的凝胶保存在 1% 的乙酸中,直到再用
来源:丁香实验