方案6 用溴化氰切割 Met-X 键实验

一、还原

1.将蛋白质溶解在 0.2mol/L 碳酸氢铵中，终浓度为 10~20mg/mL。

2.加人β-巯基乙醇，其浓度在 1%~5% 之间（体积分数）。

3.在溶液上方吹扫氮气以置换氧气，盖上试管，在室温下孵育付夜

4.用 SpeedVac 浓缩器干燥样品。加热样品会有助于碳酸氢铵挥发。

二、溴化氰切割

5.将干燥的样品（10~20 mg/mL 重新溶解于 70% 的甲酸中。

6.在蛋白质溶液中直接加入固体溴化氰（每毫克蛋白质中加人 2 mg 溴化氰）。

对于很少量的蛋白质，加入一小块溴化氰即可。

溴化氰的加人量通常是甲硫氨酸残基的 20~100倍，也就相当于蛋白质的量和溴化氰的量大致相同。

7.盖上试管，使反应在室温避光条件下进行 18~20 h。

8.用 5 倍体积的水稀释反应混合物，以终止反应；在 SpeedVac 浓缩器中，通过冷冻干燥作用除去多余的试剂。

产物可以通过液相层析或凝胶电泳分离（或-20°C 储存）。

9.为了除去痕量溴化氰污染，把相关器具（如药匙、试管）浸在次氯酸钠溶液中，持续几分钟直到停止冒泡。