方案4 新生动物的移植实验

新生动物的移植实验在许多方面与成体移植实验是相同的，但也存在着一些不同点。本节提供的大部分实验是以新生早期大鼠为受者的，当然，也有其他实验者以出生后较晚的动物或其他种属动物为受者（LundandYee1992)。

一、常规操作和麻醉

如前所述，大鼠的妊娠期为大约 21~22d, 为了预先确定手术的日期，最好确知妊娠的时间。在孕鼠分娩前和分娩后，都要保持安静的环境。应激的动物容易早产，并可能吃掉它们的幼崽，即便在产后数天内，这种情况也可能发生。孕鼠应单笼喂养。出生当天被定为出生后 0 天（postnatalday0,PO), 作者的实验室通常使用出生后 l~3d 的大鼠。

1.在预先准备手术的时间里，幼崽离开母体的时间应尽可能短。

2.一次从母鼠身边取走几只幼崽到手术室中。处理幼崽的时候通常要戴手套，幼崽应放在柔软干净的地方，并有暖光照射，要避免过热和脱水。

3.低温麻醉，将幼崽淹没在冰水中 2~5 min，直至看不到反射和运动。具体的麻醉时间根据种属和年龄来确定。

二、移植步驟

由于新生鼠体积较小，很难做到正确定位和精细手术。在文献中，可以找到许多不同的供新生鼠手术用的装置。例如，Lund 和 Yee(1992) 记述了一种用光纤照明系统从动物下面照明的移植用手术台。通过透射光可以看到主静脉窦（major venous sinuses), 并以之作为基准，通过立体定位或目测完成移植。幼崽可以用模具等固定在一个确定的位置上。最近发明了小型低温立体定位仪（Cunningham and McKay1993)，可以用小号耳杆固定动物，调节耳杆相对于鼻子的角度，实施立体定位手术（图 14-9)。作者的实验室也使用了这种仪器。这种仪器可以单独使用，也可以固定在常用的成年动物手术台上使用。这种手术台有一个夹层，其中放置干冰和 70% 乙醇的混合物，以便在手术中保持动物的低温状态。

1.夹起头部皮肤，用解剖刀片或一把小剪刀轻柔地剪开皮肤，注意不要剪到颅骨以及正在形成颅骨的软骨，. 尤其不能伤及矢状窦。幼崽在整个手术过程中应保持低体温。

2.把幼崽放在手术台上，使用耳杆固定幼崽时，拉开皮肤，显露发育中的外耳道，轻柔地加上耳杆。

3.在作者的实验室，应用连有小直径玻璃毛细管的 Hamilton 注射器为新生动物注射细胞悬液，方法如上所述。其他研究者也有报道将大块或完整组织如视网膜或新皮质直接植入到一个脑内可达位点（LundandYee1992)。向大脑深部位点移植时，要尽量避免伤及硬脑膜和脑膜下的实质组织。

4.移植用的注射器可以固定在常规立体定位仪上，定位的方法与成体手术时在大仪器上的方法一致（图 14-9)。

5.填充注射器的方法与成体实验一样。注射量最大为每个位点 2ul; 小范围内，如海马，1ul 更好，最好分多个位点注射。

6.为小鼠注射细胞悬液时，最好使用纳升（nanoliter) 级体积，为了做到这一点，推荐使用直接连有玻璃毛细管的纳注射器，注射器既可以固定在成体动物用立体定位仪上也可用于连有立体定位仪的显微操纵台。小鼠可以用耳杆固定在新生大鼠的操作台上，否则，应使用模具固定头部。

7.手术完成后，用细线缝合中线上的切口，注意不要撕裂皮肤。缝线留下的线头要短，以避免被母鼠拆掉缝线。幼崽清除掉身上的血后，在灯下逐渐恢复体温。如果需要，可以轻压尾部以刺激呼吸。幼崽在回到母体身边时，应完全苏醒。