啮齿类动物中枢神经系统移植实验

其他实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本章重点阐述了啮齿类动物 CNS 移植技术在实验中的应用，并介绍了制备移植物的不同方法。在本章介绍的移植实验中，受者可以是成年、新生或胚胎动物，移植物是啮齿类动物胚胎 CNS。除了直接分离的早期胚胎或胎儿组织，其他组织或细胞，如单独培养的干细胞（第十一章)，来源于 CNS 或其他组织的经过遗传修饰的细胞，同样可以用于 CNS 移植，如移植技术在先体外后体内基因转移中的应用（Kawaja et al.1992)。

来源：丁香实验

操作方法

方案1 胚胎中枢神经组织的分离实验

CNS 移植物对供者年龄有一定要求，只有来自胚胎/胎儿或新生供者的移植物才能在分离后直接移植成功。一般认为，移植的最佳时期是在神经元进行最后的细胞分裂而没有形成广泛的轴突投射之前（Bj6rklundandStenevi1984)。.. 一、啮齿类动物的孕程 1.最好选择知道确切交配时间（阴栓阳性的日期）的孕鼠。在交配成功之后的第一个清晨，检查雌鼠，可在阴道处发现黄白色阴栓，将这

方案2 细胞/组织的制备实验

分离出来的移植物需要进一步制备，制备的方法有如下三种：分离后含有残存的组织块或聚集物的细胞悬液；单细胞悬液；完整的组织块。完整的组织块常用于外科手术补洞的移植实验，如 Stenevi 等（1985) 所做的那样。此外，Soteb 和他的同事曾经把小脑原基的组织块植入小脑发育缺陷的小鼠脑内（Sotelo and Alvarado Malkrt 1987)。实验者应用整块组织的原因可能是在

方案3 成体移植实验

本节重点讲述向成年受者脑实质中注射细胞悬液的方法，其他文献中有关于脑室移植（Freed1985) 和把组织块植入脑内移植用空腔的报道（Stenev1etal.1985)。一、麻醉和常规手术操作 1.大鼠根据当地实验室方法麻醉。 2.大鼠置于立体定位仪上，使移植物得以精确定位，并可反复放置。 3.动物深度麻醉后，剃去头上的毛，用 70% 乙醇擦拭皮肤。用解剖刀片纵向切开头部皮

方案4 新生动物的移植实验

新生动物的移植实验在许多方面与成体移植实验是相同的，但也存在着一些不同点。本节提供的大部分实验是以新生早期大鼠为受者的，当然，也有其他实验者以出生后较晚的动物或其他种属动物为受者（LundandYee1992)。一、常规操作和麻醉如前所述，大鼠的妊娠期为大约 21~22d, 为了预先确定手术的日期，最好确知妊娠的时间。在孕鼠分娩前和分娩后，都要保持安静的环境。应激的动

方案5 胚胎移植实验

在研究发育的过程中，胚胎大脑的宫内细胞移植是非常有用的方法（Campbell et al.1995;Brustle et al.1995;FisheH 1995;Olsson et al.1997,1998a)。细胞可以通过手动注射移植到胚胎脑室中。使用更精密的仪器，如超声波辅助移植可以把细胞移植到受体胚胎的实质（Olssonetal.1997), 或神经管的空腔中（LiuetaL1998)