原理
由于卵白素与生物素具有高度亲和力，可形成卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC复合物），ABC 复合物与生物素化二抗结合，最后形成抗原-抗体-生物素体二抗-ABC复合物。该方法比单PAP法灵敏，背景染色低，受到广大研究工作者的观迎。
材料与仪器
抗体
PBS H2O2 血清 DAB 苏木精
显微镜
PBS H2O2 血清 DAB 苏木精
显微镜
步骤
1. 标本固定后，PBS洗涤；
2. 1 %H2O2（或1 %H2O2甲醇）阻断内源性过氧化物，室温10～20 分钟；
3. PBS洗2×3 分钟；
4. 正常血清（二抗的正常血清）孵育，室温20 分钟；
5. 滴加一抗，室温1 小时或4 ℃过夜；
6. PBS洗3×3 分钟；
7. 滴加二抗，室温30 分钟；
8. PBS洗3×3 分钟；
10. PBS洗；
11. 0.04 %DAB+0.03 %H2O2显色5～10 分钟；
12. 充分水洗；
13. 苏木精复染、封片、镜检。
2. 1 %H2O2（或1 %H2O2甲醇）阻断内源性过氧化物，室温10～20 分钟；
3. PBS洗2×3 分钟；
4. 正常血清（二抗的正常血清）孵育，室温20 分钟；
5. 滴加一抗，室温1 小时或4 ℃过夜；
6. PBS洗3×3 分钟；
7. 滴加二抗，室温30 分钟；
8. PBS洗3×3 分钟；
9. 加ABC液（A与B液等量，于用前30 分钟混合），室温60 分钟；
10. PBS洗；
11. 0.04 %DAB+0.03 %H2O2显色5～10 分钟；
12. 充分水洗；
13. 苏木精复染、封片、镜检。
注意事项
在各种免疫细胞化学技术中，都需要注意的是：
1. 在整个染色过程中，标本不能干燥，各步骤之间应充分洗涤。
2. 上述各项方法操作简繁不等，快慢不一，敏感性、特异性也有不同，成本费用有高有低。
3. 在实验中选用哪种方法，主要取决于实验目的和实验室条件。
4. 为了取得可靠的结果，应严格设置阳性对照和阴性对照，如果出现假阴性或假阳性以及背景染色过深等问题时，应从标本质量、一抗及其它试剂的质量、稀释度及操作步骤等方面分析和寻找原因，并有针对性地加以解决和克服，即会取得满意效果。
1. 在整个染色过程中，标本不能干燥，各步骤之间应充分洗涤。
2. 上述各项方法操作简繁不等，快慢不一，敏感性、特异性也有不同，成本费用有高有低。
3. 在实验中选用哪种方法，主要取决于实验目的和实验室条件。
4. 为了取得可靠的结果，应严格设置阳性对照和阴性对照，如果出现假阴性或假阳性以及背景染色过深等问题时，应从标本质量、一抗及其它试剂的质量、稀释度及操作步骤等方面分析和寻找原因，并有针对性地加以解决和克服，即会取得满意效果。
来源：丁香实验
