原理
乳腺主要由腺上皮组成，培养成功时可获纯上皮细胞培养物。乳腺材料易于获得，既可培养正常乳腺，也可利用乳腺癌组织。乳腺组织不难培养，是很好的培养和研究对象。
材料与仪器
乳腺
Hanks 培养液
吸管 纱布
Hanks 培养液
吸管 纱布
步骤
一、取材
二、培养程序
1. 直接培养法
适于培养含纤维少的软组织，其主要过程是
（1）在含有少量培养液或Hanks液的容器中，用锋利刀片将组织反复切割成碎块（或用剪刀剪切）。
（2）把组织碎块连同液体注入离心管中，再补加少许培养液，用吸管吹打片刻，置试管架中3~5 分钟。
（3）此时乳腺细胞团或单个细胞大多沉降至管底，而脂肪或其它含纤维多的碎块悬于液体上部；吸除上层液可排除非腺细胞成分，如此可重复2～3 次。
（4）末次处理结束后，向沉降管中再补加培养液，用吸管稍吹打，使沉降物重悬。
（5）不待细胞团块下降立即通过3～4 层无菌沙布滤入另管中。调整好适宜密度，接种入培养瓶中培养。
2. 胶原酶消化法
适于处理含纤维多的较硬组织，其过程与培养其它组织相同。
培养正常乳腺可从乳腺切除组织或乳腺成形术组织取材。预先把无菌容器送交手术室（最好含有培养液），委托术者选脂肪少、腺组织多的部位，切取少许，送培养室立即进行培养。获取组织后，应先剥除脂肪组织；培养正常乳腺组织宜用胶原酶消化法。培养乳腺癌组织可采用两种方法。
二、培养程序
1. 直接培养法
适于培养含纤维少的软组织，其主要过程是
（1）在含有少量培养液或Hanks液的容器中，用锋利刀片将组织反复切割成碎块（或用剪刀剪切）。
（2）把组织碎块连同液体注入离心管中，再补加少许培养液，用吸管吹打片刻，置试管架中3~5 分钟。
（3）此时乳腺细胞团或单个细胞大多沉降至管底，而脂肪或其它含纤维多的碎块悬于液体上部；吸除上层液可排除非腺细胞成分，如此可重复2～3 次。
（4）末次处理结束后，向沉降管中再补加培养液，用吸管稍吹打，使沉降物重悬。
（5）不待细胞团块下降立即通过3～4 层无菌沙布滤入另管中。调整好适宜密度，接种入培养瓶中培养。
2. 胶原酶消化法
适于处理含纤维多的较硬组织，其过程与培养其它组织相同。
常见问题
一、讨论
1. 上皮细胞和间充质关系密切，已证明上皮细胞生长和分化因子来源于间充质。
在体内，上皮细胞生长在由胶原组成的基膜上，基膜含有胶原蛋白、附着蛋白和氨基多糖；在体外培养时，上皮细胞和间充质依存关系仍然存在。
上皮细胞生长在胶原上比生长在其它底物上效果更好。正常上皮细胞与其它组织相互依赖性大，较难培养。
考虑到这些特点和采取相应措施，有助于提高培养成功率。
2. 在初代培养成功后，为进一步获取乳腺细胞培养的成功，主要需解决刺激乳腺细胞持续生长问题。
只有旺盛的细胞生长，才能压制成纤维细胞，获得纯上皮细胞培养物。
其次是生长后的乳腺上皮细胞对底物（特别是塑料底物）附着甚牢不易解离，不利于制成细胞悬液进行传代。
为克服这些障碍，当前多采用以下一些措施：在接种底物上铺以胶原层较好，既利乳腺细胞生长，也易使细胞分离。
有人还证明培养在胶原上的乳腺细胞比生长在塑料底物上的同样细胞对固醇类激素更易发生反应。
此外，也可在胶原层上再接种饲细胞，对压制成纤维细胞和促乳腺上皮细胞生长也有作用。
其次为选用适宜的培养条件，是乳腺上皮细胞培养的另一重要因素。
使用无血清培养基MCDB202 再补加牛垂体浸出物效果甚好。或用更加完善的无血清培养基MCDBl70，再加上皮细胞生长因子（EGF）、胰岛素、氢化可的松、猪促乳素和前列腺素E1 等，不论对正常乳腺上皮细胞或乳腺癌细胞，都有极好的促生长效应。
在不能得到像MCDB 这种培养基的情况下，—般使用Eagle 或1640 等培养基和小牛血清，再补加胰岛素、氢化可的松等，都利于乳腺上皮细胞生长。
1. 上皮细胞和间充质关系密切，已证明上皮细胞生长和分化因子来源于间充质。
在体内，上皮细胞生长在由胶原组成的基膜上，基膜含有胶原蛋白、附着蛋白和氨基多糖；在体外培养时，上皮细胞和间充质依存关系仍然存在。
上皮细胞生长在胶原上比生长在其它底物上效果更好。正常上皮细胞与其它组织相互依赖性大，较难培养。
考虑到这些特点和采取相应措施，有助于提高培养成功率。
2. 在初代培养成功后，为进一步获取乳腺细胞培养的成功，主要需解决刺激乳腺细胞持续生长问题。
只有旺盛的细胞生长，才能压制成纤维细胞，获得纯上皮细胞培养物。
其次是生长后的乳腺上皮细胞对底物（特别是塑料底物）附着甚牢不易解离，不利于制成细胞悬液进行传代。
为克服这些障碍，当前多采用以下一些措施：在接种底物上铺以胶原层较好，既利乳腺细胞生长，也易使细胞分离。
有人还证明培养在胶原上的乳腺细胞比生长在塑料底物上的同样细胞对固醇类激素更易发生反应。
此外，也可在胶原层上再接种饲细胞，对压制成纤维细胞和促乳腺上皮细胞生长也有作用。
其次为选用适宜的培养条件，是乳腺上皮细胞培养的另一重要因素。
使用无血清培养基MCDB202 再补加牛垂体浸出物效果甚好。或用更加完善的无血清培养基MCDBl70，再加上皮细胞生长因子（EGF）、胰岛素、氢化可的松、猪促乳素和前列腺素E1 等，不论对正常乳腺上皮细胞或乳腺癌细胞，都有极好的促生长效应。
在不能得到像MCDB 这种培养基的情况下，—般使用Eagle 或1640 等培养基和小牛血清，再补加胰岛素、氢化可的松等，都利于乳腺上皮细胞生长。
来源：丁香实验
