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胡萝卜根离体培养实验

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3017

实验试剂

 

1. MS 培养基 10 mg/L 2,4-D 2 mg/L 6-BA

2. 70% 乙醇

3. 0.1% 升

实验设备

 

1. 超净工作台

2. 灭菌锅

3. 显微镜

4. 接种器械

5. 不锈钢打孔器

6. 烧杯( 500ml )

7. 培养皿( 9cm )

8. 移液管

实验材料

 

市售大而新鲜的胡萝卜

实验步骤

 

1. 将胡萝卜用自来水冲洗干净,用刮皮刀除去表皮 1-2mm ,横切成大约 10-40mm 厚的切片。以下步骤全部无菌操作。
2. 胡萝卜片经 70% 乙醇处理 30-60 秒后,无菌水冲洗一遍,再用 0.1% 升汞或饱和漂白粉溶液浸泡 10 分钟,无菌水冲洗 3-5 次。
3. 将胡萝卜片平放于培养皿中,一手用镊子固定胡萝卜片,一手用打孔器按平行于组织片垂直轴方向打孔。每个孔应打在靠近维管形成层的区域,务必打穿组织。然后从组织片中抽出打孔器,用玻棒轻轻将圆柱体从打孔器中推出,放到无菌水的培养皿中。重复打孔步骤,直至制备足够数量的组织圆柱体。
4. 用镊子取出 1-2 条胡萝卜圆柱体,放入另一含无菌水的培养皿中,用刀片切除圆柱体两端各 2mm 长的组织。将剩下的组织切成厚约 2mm 的小圆片。在整个切割操作中要多次火焰消毒镊子和解剖刀,冷却后再使用。
5. 用镊子将圆片转到灭菌的滤纸上(每次一片),将圆片两面的水分吸干,并立即接种到培养基表面。每瓶接种 6-8 片。
注意:接种时使三角瓶呈一定的倾斜度,用手拿镊子、灼烧等整个接种过程不要直接在培养基上方完成,以减少污染机会。
6. 将培养物置于 25℃温箱中培养。可将一部分放在光下培养,一部分放在暗中培养,比较光下和暗处对诱导愈伤组织的反应。

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