原理
肝实质由大量肝细胞和少量间质组成，人胎儿、成人和动物的肝脏皆可用于培养；肝脏具有取材方便和易于生长的优点，能获得典型上皮细胞培养。肝细胞形态规整，有多种功能并具有代谢活化致癌物的能力，适用做多种研究；我国已建有多个人肝癌细胞系。
材料与仪器
肝脏
BSS 消化液 胰蛋白酶 胶原酶
注射器 离心管 培养基
BSS 消化液 胰蛋白酶 胶原酶
注射器 离心管 培养基
步骤
一、初代组织块培养
二、初代消化法培养
2. 移入1：1 的0.1 %胰蛋白酶和0.1 %胶原酶（都用无钙镁BSS配制）中，4 ℃冷消化10~12 小时后，通过250 微米和64 微米尼龙网或不锈钢纱网滤过（用纱布滤过亦可）。
3. 收集细胞、BSS液洗1~2 次、计数、接种培养。
消化培养肝细胞的另一种方法是灌流法：肝脏灌流需用全肝，以较小动物如小鼠和大鼠为好。
1. 无菌解剖动物，取出肝脏，先用BSS洗除血污。
2. 取5 ml注射器一支，吸取消化液后，把注射器头轻轻插入肝管中，用线绳结扎牢固，以防消化液漏出，轻轻把消化液注入胆管系统，并不时轻柔压肝脏，以便消化液进入肝小叶中；消化液在肝内停留20~30 分后，在吸出消化液的同时并轻柔压肝脏，以使肝细胞脱落和消化液吸出。
3. 待吸净消化液后，注入离心管中，低速离心分离，用RPMI1640培养基培养（较其它培养基为好），能获得较纯的肝上皮细胞和获较好的效果。
肝组织做组织块培养效果很好。取新鲜肝脏，先剥除被膜和血管等纤维成分，用刀或剪刀把肝剪成1 mm3左右的小块，采用贴壁培养法。肝组织易于贴壁，生长力好，一般次日即可出现生长晕。
二、初代消化法培养
1. 把肝组织切成2~4 立方毫米的小块，用不含钙镁的BSS液洗两次。
2. 移入1：1 的0.1 %胰蛋白酶和0.1 %胶原酶（都用无钙镁BSS配制）中，4 ℃冷消化10~12 小时后，通过250 微米和64 微米尼龙网或不锈钢纱网滤过（用纱布滤过亦可）。
3. 收集细胞、BSS液洗1~2 次、计数、接种培养。
消化培养肝细胞的另一种方法是灌流法：肝脏灌流需用全肝，以较小动物如小鼠和大鼠为好。
1. 无菌解剖动物，取出肝脏，先用BSS洗除血污。
2. 取5 ml注射器一支，吸取消化液后，把注射器头轻轻插入肝管中，用线绳结扎牢固，以防消化液漏出，轻轻把消化液注入胆管系统，并不时轻柔压肝脏，以便消化液进入肝小叶中；消化液在肝内停留20~30 分后，在吸出消化液的同时并轻柔压肝脏，以使肝细胞脱落和消化液吸出。
3. 待吸净消化液后，注入离心管中，低速离心分离，用RPMI1640培养基培养（较其它培养基为好），能获得较纯的肝上皮细胞和获较好的效果。
三、传代培养
待细胞生长连接成片后，用BSS洗一二次，加1：1的0.025 %胰蛋白酶和0.02 %EDTA混合消化3~5 分钟，待细胞回缩，便停止消化，弃掉消化液、用BSS洗一二次，注入营养液、吹打、制成细胞悬液、再接种培养。
来源：丁香实验
