酶联免疫吸附实验(酶联免疫吸附实验)
最新修订时间:
原理
利用标记技术将酶标记到抗体(抗原)上,使待检物中相应的抗原(抗体)与酶标记抗体(抗原)发生特异性反应。在遇到相应的酶底物时,酶能高效、专一催化、分解底物,生成有颜色的产物。根据颜色的深、浅、可以判断待检物中有无特异的抗原(抗体)以及量的大小。该方法可对待检样品进行定性和定量分析;同时具有微量、特异、高效、经济、简便等优点,因此是一种广泛应用于生物和医学领域的微量测定技术。
目前使用的酶联免疫检测方法很多,其种类按检测目的可分为:
材料与仪器
待检血清
马抗人IgE抗体 辣根过氧化物酶标记的马抗人IgE 抗体 碳酸钠-碳酸氢钠洗涤液 BSA 溶液 H2SO4
酶标板
步骤
1. 包被酶标反应板
加 1:500 马抗人IgE 抗体(IgG),0.2 ml/孔。37 ℃ 孵育 2 小时后洗涤3 次,10 分钟/次。
加入 1 %BSA ,0.3 ml/孔,4 ℃过夜。取出,洗涤同上。
加入不同稀释度的待捡血清,0.1 ml/孔。37 ℃孵育 40 min 后,洗涤同上。
加入适当稀释度的酶标抗体,0.1 ml/孔。37 ℃孵育40 min 后, 洗涤同上。
加入OPD(邻苯二胺)溶液,0.15 ml/孔。室温30 分钟。
加入 5N HCI ,0.1 ml/孔。
注意事项
1. 实验时应分别设阳性对照与阴性对照孔,每一待检样品应平行作两份,以保证实验结果的准确性。
常见问题
一、实验结果
来源:丁香实验