制备多块梯度胶

1.  如灌制均一浓度凝胶一样在多板凝胶灌制装置中组装好微型胶夹层。

 

2.  如图一、安装好30 ml 梯度发生器、磁力搅拌器、蠕动泵（可选用）和聚乙烯Tygon管，梯度发生器的输出端连接于制胶室下方的输入口。

图一

3.  配制丙烯酰胺轻溶液和重溶液，省略脱气步骤，在使用前才加入过硫酸铵，如制作5片0.75 mm 厚的微型胶，两种液体各需约12 ml。在用前重溶液应置于冰上。

 

4.  在输出阀和连通阀关闭时，往贮液室加入重溶液，稍打开连通阀，让小量重溶液通过其流到混合室，排出阀中的空气。

 

5.  往混合室中加入轻溶液。按每12 ml 液体4 μl 的量往各室中加入TEMED。用一次性吸管加以混和。

 

6.  打开磁力搅拌器，开启连通阀，然后慢慢打开输出阀，让溶液在重力的作用下从梯度发生器流出进入制胶室，流速调整在3~4 ml/min。

7.  当所有浓度梯度液体流出混合室后，空气要进人输出管前，关闭输出阀，往两液室加入封堵液后，再慢慢开启阀门。

8.  让在制胶室的丙烯酰胺液体在封堵液的推动下向上流,进入平板夹层，当封堵液将到达玻璃平板的底部时，关闭阀门。

9.  往每片凝胶夹层中快速地加入100 μl 水饱和异丁醇，让凝胶静置聚合1 h。

10.  配制和灌制积层胶。

 

11.  撤去与梯度犮生器的连接后，将制胶装置放在一个洗涤池中，卸下前面板，从底部排出封堵液，取出凝胶。