硝酸还原酶活性的测定

硝酸还原酶活性的测定的基本原理是硝酸还原酶催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐，产生的 NO₂^- 可以从植物组织内渗透到外界溶液中，并积累在溶液中，测定反应溶液中 NO₂^- 含量的增加，即表明酶活性的大小。

在一定条件下，NO₂^- 的生成量与硝酸还原酶活性呈正相关。NO₂^- 含量可用磺胺显色法测定，即在酸性条件下与对-氨基苯磺酸（或对-氨基苯磺酰胺）发生重氮反应，生成的重氮化合物又 a^-萘胺（或 N-萘基乙二胺盐酸盐）生成红色偶氮化合物，可在 540 nm 下比色测定。反应如下：

硝酸还原酶活性一般釆用活体法或离体法测定。离体法需将材料磨成匀浆，经过滤或离心除去残渣，以上清液为硝酸还原酶粗酶液进行测定。由于研磨中 NADH 受损失，必需外加 NADH 方可测定。活体法是直接用鲜活组织进行测定，环境中的 NO₃^- 进入细胞后，被硝酸还原酶还原成 NO₂^- 并扩散到细胞外在溶液中积累，测定溶液中 NO₂^- 的含量即可得知硝酸还原酶活性的大小。活体法不破坏细胞原有的酶反应系统，NADH 可由代谢反应不断生成，无须外加。活体法简便、快速，不需要贵重仪器设备及低温条件，但重复性欠佳，应做一定量的重复。本实验采用活体法测定硝酸还原酶活性。