测定植物组织中硝酸还原酶离体法中对照组应如何制作？

1.取2克材料，洗涤并切碎，放入研钵中，然后放入低温冰箱中冷冻30分钟。取出并在冰浴中添加少量石英砂和提取缓冲液（每克鲜重分别以1ml，2ml和4ml两次添加玉米，小麦和大米）。研磨成匀浆，在低温下离心5分钟（4000r / min）。上清液是粗酶提取物。以上操作应尽可能在冰浴中进行。

2.将0.4ml粗酶提取物，1.2ml 0.1mol / L KNO 3磷酸盐缓冲液，0.4ml NADH2溶液倒入准备好的带刻度的试管中，并充分混合，在30℃孵育30分钟，不添加NADH 2。对照，取0.4ml蒸馏水代替。

3.孵育后，立即添加1 ml对氨基苯磺酸溶液以终止反应，添加1 mlα-萘胺溶液，显色20分钟，在台式离心机上离心10分钟，然后测量上清液在分光光度计上在540 nm波长处。

4.标准曲线制作和结果计算与体内方法相同。

硝酸还原酶一般通过细胞裂解的方式释放出来，加入适当的底物后可以测量产生的还原物的含量，从而计算出硝酸还原酶的活性。对照组可以反应这种差异，加入对照组后可以测的这种差距

硝酸还原酶（Nitrate Reductase，NR）活性测定中设置对照组的目的是为了比较待测样品与对照组的差异。对照组一般是不含硝酸盐的溶液，也就是说，在对照组中硝酸还原酶不能还原任何硝酸盐，因此其产生的还原物质是极少量的，这样可以帮助我们确定样品中硝酸盐还原的程度。

硝酸还原酶（NR）活性测定是对植物组织中硝酸还原酶活性的一种评估方法。在测定过程中，对照（空白）样本的制备是非常重要的，因为它可以帮助消除非特异性结果的干扰。以下是硝酸还原酶活性测定对照（空白）制作的具体步骤：

1. 准备试剂：准备好所有需要的试剂和溶液。通常，这些试剂包括：

- 提取缓冲液（如50 mM磷酸缓冲液，pH 7.8）

- 硝酸盐（如NaNO3）

- 光还原剂（如亚硝酸钠，NaN3）

- 增强剂（如有必要）

- 沸水浴

2. 准备对照样本：

- 取一份与待测样本等量的提取缓冲液，作为对照样本的提取缓冲液。

- 在对照样本的提取缓冲液中加入与待测样本相同体积的硝酸盐溶液。

- 如有必要，加入与待测样本相同体积的增强剂溶液。

3. 混合和对照处理：

- 将对照样本的提取缓冲液、硝酸盐溶液和增强剂溶液（如使用）充分混合。

- 将对照样本与待测样本同时进行相同的处理步骤，如提取、离心、加入光还原剂等。

4. 空白对照测试：

- 在进行NR活性测定时，将与照样本的试管与待测样本的试管一起进行光还原反应。

- 反应完成后，测量对照样本中的亚硝酸盐生成量。这将作为NR活性测定的阴性对照，以消除非特异性结果的干扰。

5. 数据分析：

- 将待测样本的亚硝酸盐生成量减去对照样本的亚硝酸盐生成量，得到NR活性的净生成量。

- 根据实验条件和试剂浓度，将净生成量转换为NR活性单位，如纳摩尔每分钟每毫克蛋白质（nmol/min/mg protein）。

具体的试剂、浓度和反应条件可能因实验设计和目的物种而异。在进行硝酸还原酶活性测定时，请参考相关实验方案或咨询经验丰富的实验室成员。