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重组腺相关病毒载体的生产实验
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简介
对有关最新的腺相关病毒载体（AAV ) 的构建方法做了说明。野生型的腺相关病毒在人体中并不存在，在某些系统中，腺相关病毒可以整合到被感染细胞的基因组中从而使得转基因在生物体内长期表达。但是，怎样获得高浓度的辅助载体和病毒载体相独立的腺相关病毒载体一直以来是个难题。Samulsk1 和他的同事们提出的一种基于质粒的体系为解决这一难题迈出了重要的一步。
来源：丁香实验
操作方法
腺相关病毒包装流程、注意事项与常见问题
AAV 介绍腺相关病毒（AAV）属微小病毒科（parvovirus），为无包膜的单链线状 DNA 病毒。只有在腺病毒或者疱疹病毒等辅助病毒协助下，宿主才能产生具有感染性的 AAV，所以 AAV 被称作腺相关病毒。典型的 AAV2 基因组约 4800bp，包括 2 个反向末端重复序列（ITR，145 bp）和两个读码框（ORF）-Rep 和 Cap（图 1）。ITR 对合成互补 DNA 链是必需的；
病毒滴度检测——腺相关病毒腺相关病毒滴度检测采用实时荧光定量 PCR 法：滴度单位：vg/mL，指每毫升中含有的病毒基因组拷贝数1、检测步骤稀释标准品质粒，设置标准品的拷贝梯度为 105、106、107、108、109、1010。配置 QPCR 反应体系，每个样品和标准品设计 3 个复孔，进行 QPCR 反应。2、 数据分析（以 HBAAV2/9 -GFP 滴度测度为例）原始实验数据。Roche LC96 实时荧光定量 P
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