🔥 transwell 细胞迁移实验

细胞迁移是指细胞在外界信号的作用下从一个位置（区域）移动到另一个位置（区域）的过程，这个过程在生物体内发挥着非常重要的生理和病理学作用，比如损伤修复、肿瘤转移、免疫细胞的迁移、组织修复等。

Transwell 是一种实验技术，这项技术的主要材料是 Transwell 小室（Transwell chamber，Transwell insert）。Transwell 小室外形如同一个小杯子，杯底有通透性的膜（孔径 0.1-12.0 µm，细胞迁移需要选择孔径较大的小室以便细胞穿过膜，一般用 8.0、12.0 μm）。

看实验目的及实验细胞大小：1、不需要细胞穿过 transwell 小室（研究不涉及细胞运动能力）：如 transwell 小室细胞共培养、Caco-2 Transport 实验及构建细胞极化模型等实验，选择孔径较小的 transwell 小室，如：0.1 μm 孔径多用于药物转到研究，0.4 μm、1 μm 孔径的小室多用于共培养，转运及通透性研究。2、需要细胞穿过 transwell 小室，到达

根据实验目的及实际情况考虑。Transwell 小室内为上室，培养板内为下室，如研究 A 细胞分泌、代谢产生的物质对 B 细胞的影响或趋化作用，上室接种 B 细胞，下室接种 A 细胞。

首先，细胞在离心管中加入适量培养基混匀以充分使细胞团分散，培养基加太多导致细胞团分不散；其次，将吹散的细胞加入器皿时需要用枪轻轻上下混匀；最后，细胞加完需要将器皿轻轻晃动，不要只往一个方向晃动，不要摇动过久。

（1） 打开软件 Image J，在「File」中新建文件「New」，导入要分析的图片；（2）点击「Image」→「Type」→「8-bit」将图片转换成黑白；（3）点击「Edit」→「Invert」将图片背景转换成黑色；（4）点击「Image」→「Adjust」→「Threshold」，选择「B&W」，通过调节滚动条使图片尽可能的包含所有细胞的同时去除背景中的杂质，点击「apply」应用

（1）悬浮细胞最好在前一天进行饥饿处理（即无血清培养基过夜培养，以便增强细胞迁移能力）；（2）实验当天，收集细胞，离心去上清，用无血清培养基重悬，计数；（3）每组细胞的配制：每组 3 复孔。按照每孔 10^5 个细胞 / 200 μl 的量配制 4 个复孔的用量（多配 1 孔），即 4×10^5 个细胞 / 800 μl；（4）transwell 下室加入 700-800 μl 的含 10% 胎牛