端粒显示实验

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

端粒（telomere）是真核细胞染色体末端的 DNA 重复序列，它与多种端粒结合蛋白结合在一起，发挥重要的生物学功能，在细胞分裂的过程中，尽管端粒也会不断的缩短，但可以通过端粒酶的催化，以自身 RNA 为模板进行补充，从而代偿了这一损失（如图 11-1 所示）。

端粒的功能保护染色体末端完整性，稳定染色体，保障染色体 DNA 在复制的过程中不被缩短，保护染色体结构基因，防止基因组 DNA 降解、防止染色体末端融合，调节细胞生长、衰老等作用。

目前，用于端粒显示实验的方法主要有 3 种：Southern印迹法、Q-FISH法和qPCR法。

原理

Southern印迹法检测端粒长度的基本原理是尽管不同物种的端粒的重复序列可存在差异（表11-2），在同一种生物体内为特定序列，如人端粒是由 6 个碱基重复序列（TTAGGG）和结合蛋白组成。通过与放射性同位素 32P 标记的探针 32P-（TTAGGG）n，检测末端限制性片段（terminal restriction fragments，TRF）的长度分布情况，并计算出端粒长度的平均值。

Q-FISH法检测端粒形态及长度的基本原理是尽管不同物种的端粒的重复序列可存在差异（表11-2），但在同一种生物体内为特定序列，如人端粒是由 6 个碱基重复序列（TTAGGG）和结合蛋白组成。因此，对于端粒长度的检测，传统上可以对上述重复序列设计探针，采用核酸分子杂交技术进行测量。

QPCR法检测端粒长度的基本原理是尽管不同物种的端粒的重复序列可存在差异（表11-2），但在同一种生物体内为特定序列，如人端粒是由 6 个碱基重复序列（TTAGGG）和结合蛋白组成。因此，对于端粒长度的检测，传统上可以对上述重复序列设计探针，采用核酸分子杂交技术进行测量。基于一个细胞中端粒长度的均值与端粒-单拷贝基因比率（Telomere-to-Single Copy Gene ratio，T/S 比率）有关的证据，通过测量和计算出 T/S 比率，从而测量出端粒的长度。

来源：丁香实验团队

操作方法

Southern印迹法检测端粒长度

Southern印迹法检测端粒长度是应用最为广泛的端粒检测方法。

Q-FISH法检测端粒形态及长度

随着近年来荧光标记技术的发展，定量荧光原位杂交法（quantitative fluorescence in situ hybrid-ization，Q-FISH）也被用于端粒的显示及长度的测量，其优点首先是可以对组织切片进行原位的检测；其次，在测量端粒长度的同时，可以观测端粒的长度、完整性，以及是否存在染色体末端端粒粘连等情况；再次，对于培养细胞而言，不仅可以检测间期细胞的端粒长度，而且可以用来测

QPCR 法检测端粒长度

随着近年来 PCR 技术及流式细胞术的发展，实时定量 PCR（quantitativePCR，qPCR）技术及流式荧光原位杂交法（flow-fluorescence in situ hybridization，Flow- FISH）等操作相对简单、结果直观的方法也被用来显示端粒的长度。