从脐血来源多能祖细胞（CB-MNCs）中分离并培养CD34+细胞实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

来源：《人干细胞培养》

来源：丁香实验

操作方法

从CB-MNCs中分离CD34+细胞

(a)准备过柱缓冲液，用抽真空装置去除气体。(b)每108个CB-MNCs用终体积300μL缓冲液重悬。(c)每108个CB-MNCs悬液加100μL FcR阻断剂，抑制CD34微珠非特异性结合或通过Fc受体介导与非靶细胞的结合。(d)每108个CB-MNCs悬液加100μL CD34微球进行细胞标记，充分混匀后在6〜12℃冰箱放置30min。(e)加PBSA洗，室温200g离心10min;加适量

体外扩增CD34+细胞

(a)用添加细胞因子的培养基重悬细胞（50 ng/mL Flt-3配体，50 ng/mL干细胞因子，20 ng/mL促血小板生成素和10 ng/mL IL-6)。(b)按2×104个细胞/mL的细胞浓度将CD34+细胞接种到T25培养瓶中。(C)每周两次半量换液，补充细胞因子。

饲养层细胞共培养体外扩增CD34+细胞

(a)将脐带血来源的间充质干细胞（blood-derived mesenchymal stem cells, CB-MSCs)作为饲养层细胞，用MSCs培养基重悬CB-MSCs，细胞浓度为5×104个细胞/mL。(b)将CB-MSCs接种到6孔板(C)每周两次半量更换新鲜培养基。(d)当CB-MSCs达到以上汇合时，用10μg/mL丝裂霉素c处理,37℃ 2.5 h„(e)用无血清IMDM将CB-