饲养层细胞共培养体外扩增CD34+细胞

(a)将脐带血来源的间充质干细胞（blood-derived mesenchymal stem cells, CB-MSCs)作为饲养层细胞，用MSCs培养基重悬CB-MSCs，细胞浓度为5×10⁴个细胞/mL。

(b)将CB-MSCs接种到6孔板

(C)每周两次半量更换新鲜培养基。

(d)当CB-MSCs达到以上汇合时，用10μg/mL丝裂霉素c处理,37℃ 2.5 h„

(e)用无血清IMDM将CB-MSCs洗两遍。

(f)按1×10⁴个/mL CD34⁺细胞重悬于含细胞因子的共同培养基（100 ng/mL干细胞因子，100ng/mL IL-6,50 ng/mLFlt-3配体，10 ng/mL促血小板生成素）。

(g)将CD34⁺细胞接种到CB-MSCs饲养层细胞上。

(h)每周两次更换1/4培养基。

(i)2周后，收集未贴壁细胞。