饲养层细胞共培养体外扩增 CD34+ 细胞

CD34⁺ 细胞；
​灭菌 MSCs 培养基，丝裂霉素 C，共培养的培养基，细胞因子（干细胞因子 IL-6、Flt-3 配体、促血小板生成素）；
6 孔培养板；

(a) 将脐带血来源的间充质干细胞（blood-derived mesenchymal stem cells, CB-MSCs）作为饲养层细胞，用 MSCs 培养基重悬 CB-MSCs，细胞浓度为 5×10⁴ 个细胞/mL；

(b) 将 CB-MSCs 接种到 6 孔板；

(C) 每周两次半量更换新鲜培养基；

(d) 当 CB-MSCs 达到以上汇合时，用 10 μg/mL 丝裂霉素 c 处理，37℃，2.5 h；

(e) 用无血清 IMDM 将 CB-MSCs 洗两遍；

(f) 按 1×10⁴ 个/mL CD34⁺ 细胞重悬于含细胞因子的共同培养基（100 ng/mL 干细胞因子，100 ng/mL IL-6，50 ng/mL Flt-3 配体，10 ng/mL 促血小板生成素）；

(g) 将 CD34⁺ 细胞接种到 CB-MSCs 饲养层细胞上；

(h) 每周两次更换 1/4 培养基；

(i) 2 周后，收集未贴壁细胞。